影响琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 纯度的因素 凝胶浓度与质量 琼脂糖浓度不适、融化不完全或有杂质，会导致条带扭曲、分辨力下降，影响纯度判断。 电泳缓冲液 TAE/TBE 缓冲液陈旧、离子浓度异常或 pH 不当，会影响迁移速度与条带清晰度。 核酸染料 染料浓度过高易...
琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 纯度的操作步骤（简答背诵版） 制胶 称取琼脂糖溶于 TAE 或 TBE 缓冲液 ，加热熔化，冷却至 60℃左右加入核酸染料，混匀后倒入胶槽，插上梳子，待凝胶完全凝固。 点样 将 DNA 样品与 6 上样缓冲液 按比例混匀，小心加入凝胶点样孔中...
琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 纯度的原理 琼脂糖凝胶具有网状分子筛结构，不同分子在电场中按 分子量大...
1. 琼脂糖凝胶电泳法 直接观察 DNA 条带是否 清晰、无拖尾、无弥散 前端无模糊亮带（无 RNA 污染） 加样孔不发亮（无蛋白质 / 多糖污染） 可同时判断 完整性 + 纯度 2. 荧光定量法（Qubit 荧光光度计） 荧光染料 特异性结合 DNA ，不受蛋白、盐干扰 给出真实...
紫外分光光度法检测 DNA 纯度的具体步骤 （实验操作 + 考试简答通用，精简标准流程） 预热仪器 打开紫外分光光度计，预热 15～30 min，选择波长 260 nm、280 nm、230 nm。 配制空白对照（调零） 用与溶解 DNA 相同的 ddHO 或 TE 缓冲液 加入比色皿，分别在 2...
模板 DNA 纯度检测方法（实验考试 + 实操通用版） 一、最常用、最核心： 紫外分光光度法（测 OD 值） 通过核酸在紫外区的特征吸收，判断纯度与浓度。 1. 关键波长 260 nm ：核酸（DNA/RNA）特征吸收峰 280 nm ：蛋白质、酚类等吸收峰 230 nm ：多糖、盐离子...
影响 PCR 反应的主要因素（除 Mg外） 一、引物相关因素 引物 长度、GC 含量、Tm 值 引物 二聚体、发夹结构 引物 浓度 （过高易二聚体，过低扩增弱） 引物 特异性 （是否与非目标区域同源） 二、模板 DNA 相关因素 模板 纯度 （含蛋白酶、酚、盐离子会抑制 Ta...
如何确定 PCR 反应的 Mg 浓度（实验 + 考试标准答案） 一、Mg 的核心作用 是 Taq 酶的必需辅因子 ，浓度直接决定酶活性 影响 引物与模板的退火结合 影响 PCR 特异性与产物产量 影响 引物二聚体形成 二、常规适用范围 常用浓度： 1.0～3.0 mmol/L 最适浓度大...
根据引物 GC 含量优化 PCR 的方法（实验 + 考试标准回答） 一、先判断 GC 含量范围 正常： 40%～60% 常规 PCR 条件即可 高 GC ：＞60% 易形成二级结构、难扩增 低 GC ：＜40% 引物结合不稳定、特异性差 二、高 GC 引物（＞60%）的优化策略 高 GC 问题：模板...
根据退火温度优化 PCR 的实用方法（实验 + 考试都适用） 一、先确定初始退火温度 以引物 Tm 值 为基准 初始退火温度 = Tm 3℃ ~ 5℃ 一般设置在 55～62℃ 范围 二、温度偏高时的优化（无条带、产量低） 表现：扩增弱、无产物、条带很淡 优化措施： 降低退火...