特异性核酸染料（如 SYBR Green I、Hoechst 33258 等） 本身荧光信号极弱 ，但可 ** 特异性嵌入双链 DNA（dsDNA）** 的碱基对之间，结合后构象改变，荧光强度显著增强（可增强数百至数千倍）。 RNA 多为单链结构，仅局部形成少量双链，与该类染料结合能力很...
一、核心结论：灵敏度分级与适用场景 特异性核酸染料（ 优先双链 DNA 选择性染料：SYBR Green I、Hoechst 33258、Gelite Safe、SYBR Safe ）检测 RNA 中 gDNA 污染的灵敏度： 凝胶染色（琼脂糖 / 变性胶） ： 2060 pg dsDNA （SYBR Green I），Hoechst 33258...
一、核心结论：灵敏度分级与适用场景 特异性核酸染料（ 优先双链 DNA 选择性染料：SYBR Green I、Hoechst 33258、Gelite Safe、SYBR Safe ）检测 RNA 中 gDNA 污染的灵敏度： 凝胶染色（琼脂糖 / 变性胶） ： 2060 pg dsDNA （SYBR Green I），Hoechst 33258...
判断 RNA 中基因组 DNA 污染的其他常用方法 -RT 对照 PCR（无逆转录酶对照） 不加逆转录酶，直接以 RNA 为模板进行 PCR。若仍出现目的条带，说明存在基因组 DNA 污染。 琼脂糖凝胶电泳 总 RNA 电泳时，在 28S rRNA 上方出现 高分子量条带或弥散拖尾 ，提示有...
跨内含子引物 PCR 法判断基因组 DNA 污染的原理 真核生物的 基因组 DNA 中，基因由 外显子 + 内含子 组成；而 **cDNA（逆转录产物）** 是 mRNA 经剪接而来， 不含内含子 ，序列更短。 设计引物时，将 上游引物和下游引物分别位于两个不同外显子上 ，且中间跨...
琼脂糖凝胶电泳法 RNA 电泳后，在 28S rRNA 条带上方出现高分子量条带或整体弥散拖尾 ，提示存在基因组 DNA 污染。 RTPCR 阴性对照法（RT 对照） 设置不加逆转录酶的对照组，若该组仍扩增出目的条带，说明 RNA 模板中存在基因组 DNA 污染。 跨内含子引物 PCR...
紫外分光光度法判断 RNA 是否被 DNA 污染的原理 纯净 RNA 的 OD/OD 比值约为 2.0～2.2 ， 而纯净 DNA 的 OD/OD 比值约为 1.8 。 当 RNA 样品中 混有基因组 DNA 时： DNA 会使整体的 OD/OD 比值下降 ，从接近 2.0 往 1.8 靠近； 若比值明显 低于 2.0 （如 1.8...
1. 琼脂糖凝胶电泳直接观察 在 RNA 电泳图上， 28S 条带上方出现额外的高分子量条带 / 整体拖尾 ，或出现明显的 基因组条带 。 点样孔附近发亮、条带弥散、背景脏。 出现以上情况，提示有 基因组 DNA 污染 。 2. RTPCR 对照实验（最可靠、最常用） 做两组反...
影响琼脂糖凝胶电泳检测 RNA 纯度的主要因素 RNA 酶污染 环境、耗材或试剂中的 RNase 会导致 RNA 降解，条带弥散、消失，造成纯度误判。 基因组 DNA 污染 会出现高于 28S 的条带或整体拖尾，干扰 RNA 条带观察。 蛋白质 / 多糖 / 盐类残留 使点样孔发亮、条...
琼脂糖凝胶电泳检测 RNA 纯度与完整性 一、原理 RNA 带负电，在电场中向正极移动，琼脂糖凝胶起分子筛作用。 纯度高、未降解的总 RNA 电泳后可见 清晰的 28S 和 18S 两条主带 ，且 28S 亮度约为 18S 的 2 倍 。 若 RNA 降解 ，条带变模糊、弥散，甚至呈涂抹...