肝脏移植生物样本采集与保藏技术专家共识（2023，核心概要）

一、核心原则与伦理合规（必守底线）

1. 核心原则

• 以保障样本质量、保护供受者权益、符合生物安全为三大核心，全程遵循 “伦理先行、知情同意、标准化操作、全程质控、可追溯管理”。
• 样本覆盖供者（DBD/DBCD/ 活体）、受者，类型包括肝组织、血液、胆汁、尿液、胸腹水、细胞、类器官，时点贯穿移植前、术中、术后全周期。

2. 伦理与知情同意（强推荐）

1. 所有样本采集、保藏、利用必须通过伦理委员会审查，符合《生物安全法》《人类遗传资源管理条例》《人体器官移植条例》等法规。
2. 公民逝世后捐献（DBD/DBCD）：《人体器官捐献亲属确认登记表》中明确 “器官 / 组织可用于科研”，视为已签署生物样本知情同意；活体供者需单独签署《生物样本捐赠知情同意书》，由临床 / 样本库人员充分告知并保护隐私。
3. 严禁在未获知情同意、未通过伦理审查的情况下采集、使用肝移植生物样本。

3. 生物安全（强推荐）

• 含 HBV/HCV/HIV/ 梅毒等传染性病原体的样本，严格按《实验室生物安全通用要求》《病原微生物实验室生物安全管理条例》操作，配备对应等级生物安全防护设备，防止病原体扩散，全程记录采集、处理流程。
• 样本采集人员必须接受生物安全与标准化操作培训，持证上岗，双人协同完成采集（一人操作、一人核对记录）。

二、采集前准备（流程前置，强推荐）

1. 人员与信息准备

• 样本采集人员需在样本离体前 30 min进入手术室待命，提前 24 h 与临床沟通获取移植手术信息、供受者病史（肿瘤、传染病、治疗史），联合病理、科研人员确定采集部位、类型、数量。
• 准备灭菌 / 灭酶器械、无菌耗材、预冷（2~8℃）转运容器、冻存管、样本交接记录单、信息采集表，确保设备校准合格。

2. 样本分类与采集时点（核心框架）

3. 转运与时效（强推荐）

• 全肝样本离体后立即放入2~8℃无菌冷藏容器，转运至样本采集室，30 min 内完成采集、分装与低温预处理，严格记录热缺血、冷缺血时间，避免样本降解。

三、组织样本采集与处理（核心技术模块）

1. 通用规则（强推荐）

• 采集顺序：非肿瘤组织→肿瘤旁组织→肿瘤组织，不同部位 / 类型样本必须更换器械，避免交叉污染；优先选取无坏死、无出血、无严重纤维化 / 钙化、无脂肪浸润区域。
• 组织切分：每份冻存样本体积＜0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm，满足病理诊断后留存质控组织（＜1.5 cm×1.5 cm×1.5 cm），制备石蜡切片用于病理质控。

2. 全肝组织（非肿瘤性，强推荐）

• 采集部位：肝左叶、右叶各取 1 块，位于肝被膜下 1 cm，避开 Glisson 系统，体积≥2 cm×2 cm×2 cm，称重、测量三维尺寸并拍照存档（脏面、膈面）。

3. 全肝组织（肿瘤性，强推荐）

• 先取非肿瘤组织（距肿瘤边缘≥5 cm），再取肿瘤旁组织（距肿瘤边缘≤2 cm，≥2 cm×2 cm×2 cm），最后取肿瘤组织（体积＜肿瘤体积 50%）；肿瘤≤3 个需逐个采集，＞3 个优先取主瘤 + 代表性旁组织，弥漫型肝癌按非肿瘤方案采集。

4. 附属组织样本（强推荐）

• 胆囊：全层组织条（长≥1 cm，宽≥0.5 cm），生理盐水冲净胆汁后切分冻存；
• 淋巴结 / 血栓 / 瘤栓：每份体积＜0.3 cm×0.3 cm×0.3 cm，多个淋巴结按由大到小顺序采集，满足病理后留存≥1 份冻存；
• 肝活检：供肝 / 受者移植后活检，取≥2 块组织，1 块用于病理，其余即刻冻存，避免肝被膜厚区。

5. 细胞 / 类器官样本（强推荐）

• 无菌采集组织（≥0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm），放入 4℃商用保存液低温转运，剪碎至 1~3 mm³，酶解 / 机械法制备单细胞悬液，要求细胞总数≥1×10⁶、活力≥90%，直接冻存或培养类器官（7 d 见基本形态，14 d 进入快速增长期，增长期冻存）。

四、体液样本采集与处理（血液、胆汁、尿液等，强推荐）

1. 血液样本

• 采集：供者捐献时、受者术前 24 h、术后 1 周 / 2 周 / 出院前 / 活检当日，与临床检查采血同步；成人采促凝管、EDTA 抗凝管各 1 管（3 ml / 管），儿童可仅采抗凝管；
• 处理：采集后 4℃暂存，4 h 内完成分离（血清 / 血浆），分装后冻存，避免反复冻融；
• 特殊：血清用于生化、免疫、标志物检测，血浆用于核酸、蛋白组学研究。

2. 胆汁、尿液、胸腹水

• 胆汁：术中无菌采集，分装后 - 80℃冻存，用于胆汁成分、微生物、代谢组学研究；
• 尿液：供者捐献时、受者术前 / 术后采集，无菌离心后取上清冻存；
• 胸腹水：无菌采集，离心后细胞沉淀与上清分别冻存，用于细胞学、蛋白 / 核酸检测。

五、保藏技术规范（温度、分装、质控，强推荐）

1. 保藏温度与时限

2. 分装与标识（强推荐）

• 每份样本至少分装 2 管（一管使用、一管备份），标注唯一编码（含供 / 受者 ID、样本类型、采集时间、部位、体积、操作者），信息与电子库同步；
• 冻存管密封防漏，避免标签脱落，液氮保藏需用耐低温冻存管。

3. 质量控制（全程质控）

• 组织样本：病理切片评估组织完整性、无坏死 / 污染，细胞样本检测活力、纯度、无微生物污染；
• 体液样本：检测溶血、脂血、污染情况，不合格样本标记并隔离，不得用于科研；
• 保藏过程：定期监测冰箱 / 液氮罐温度，记录波动，每 6 个月抽检样本质量。

六、转运与信息管理（可追溯核心）

1. 转运规范

• 院内转运：2~8℃冷藏箱（冰袋 / 冰盒，避免直接接触样本），无菌密封，双人核对交接，填写转运记录；
• 院间转运：符合生物安全与人类遗传资源出境规定，使用专业冷链运输，全程温度监控，附样本说明书、知情同意复印件、伦理批件。

2. 信息管理（强推荐）

• 建立电子样本库信息系统，记录：供 / 受者基本信息、伦理批件、知情同意、采集时间 / 部位 / 类型、处理流程、保藏位置、温度记录、使用记录、质控结果，全程可追溯；
• 严格隐私保护，样本编码去标识化，符合数据安全与隐私保护法规。

七、推荐意见速记（临床落地核心）

1. 伦理先行：必过伦理审查，逝世捐献按登记表视同知情，活体单独签署同意书；
2. 时效红线：全肝离体 30 min 内完成采集，血液 4 h 内分离，严控缺血时间；
3. 组织采集：非肿瘤→旁瘤→肿瘤，避坏死 / 出血，切分小体积，双人操作防污染；
4. 保藏标准：短期 2~8℃，长期 - 80℃/ 液氮，分装备份，唯一标识可追溯；
5. 生物安全：传染样本分级防护，全程记录，人员持证上岗；
6. 信息闭环：电子库全流程记录，去标识化保护隐私，质控贯穿始终。