ctDNA 高通量测序临床实践专家共识（2022年版）

一、核心定位与发布背景

• 发布单位：中国抗癌协会肿瘤标志专业委员会
• 发表期刊：《中国癌症防治杂志》2022 年 6 月第 14 卷第 3 期
• 核心目的：统一 ctDNA NGS 临床检测标准，规范应用场景，推动液态活检在肿瘤精准诊疗中的健康发展

二、ctDNA 生物学特征与检测影响因素（共识 1）

• ctDNA 本质：肿瘤细胞分泌 / 凋亡 / 坏死释放的 DNA 片段，长度 132–145 bp，半衰期 < 2 h，携带肿瘤特异性突变、甲基化等分子特征。
• 关键影响因素：
  • 肿瘤负荷、部位、分期（颅内 / 胶质瘤等 ctDNA 水平低）
  • 正常细胞 cfDNA、克隆性造血突变干扰
  • 采样时间、药物治疗、生理病理状态（炎症、妊娠等）
   
• 共识要点：ctDNA 丰度波动大、易受干扰，检测与解读需高度谨慎。

三、临床应用价值（共识 2–4）

1. 伴随诊断（共识 2）

• 适用癌种：晚期肺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌等实体瘤
• 核心场景：
  • 无法获取组织 / 组织不足时，替代组织检测驱动基因（如 EGFR、ALK、ROS1、BRAF、MET、RET、NTRK、KRAS G12C）
  • 已获批 CDx：Cobas EGFR v2、Guardant360、FoundationOne Liquid CDx 等
   
• 共识要点：仅限获批适应症与限定基因；超适应症需充分知情；阴性建议组织验证。

2. 疗效评估与预后分层（共识 3）

• 核心价值：动态监测 ctDNA 丰度 / 突变清除，早于影像学判断疗效、预测 PFS/OS
• 应用场景：靶向 / 免疫治疗早期应答、微小残留病灶（MRD）评估、复发风险分层
• 共识要点：ctDNA 是独立预后因子；治疗后早期清除提示更好预后。

3. 复发监测（共识 4）

• 核心价值：比传统标志物 / 影像学提前 1–2 个月预警复发
• 适用人群：根治术后实体瘤（尤其 Ⅱ 期高危、Ⅲ 期）
• 共识要点：阳性提示高复发风险，需尽早干预；阴性可考虑降阶治疗。

四、检测体系标准化（共识 5–7）

1. 实验室与技术规范（共识 5）

• 实验室要求：满足 NGS 实验室分区、质控；优先 NMPA 三类证试剂，LDT 需严格验证
• 样本采集与处理：
  • 首选游离 DNA 专用采血管（含保护剂），常温 6–30℃保存≤5–7 天
  • EDTA 管需 2 h 内低温两次离心分离血浆，-70℃冻存；禁用肝素管
   
• 技术要点：
  • 测序深度：低频突变需超高深度（通常 > 10 000×）
  • 噪音控制：建立背景库，用 SiNVICT、OutLyzer、Mutect2 等过滤假阳性
  • 生信分析：配对白细胞对照，区分克隆性造血与肿瘤突变
   

2. 报告规范（共识 6）

• 必备内容：患者信息、样本信息、实验室信息、检测项目、结果解读、验证数据、局限性声明、建议
• 变异分级：体细胞突变按Ⅰ 级（明确）/Ⅱ 级（潜在）/Ⅲ 级（未知）/Ⅳ 级（良性） 分级；胚系突变按 ACMG 标准
• 共识要点：报告需清晰、规范、可溯源；低丰度突变建议 dPCR 等验证。

3. 质量控制与人员资质（共识 7）

• 人员要求：实验室负责人需副高以上、临床 + 分子背景；报告签发者需 2 年以上 NGS 经验，鼓励 MTB 多学科会诊
• 质控体系：室内质控（空白、阳性、重复性）+ 室间质评（EQA）；定期性能验证（LOD、准确性、精密度）