骨肿瘤二代测序及分子检测技术临床应用专家共识

核心推荐意见

1. 适用人群与场景
   • 疑难诊断病例，或 FISH、IHC 等常规检测无法明确诊断时，可考虑 NGS 辅助诊断；需鉴别多个分子标志物时优先 NGS（推荐等级：SR）。
   • 常规分子检测阴性者，建议用 DNA+RNA 联合 NGS 复检，以避免遗漏融合等变异（推荐等级：SR）。
   • 复发 / 进展、既往治疗失败且无有效替代方案的患者，NGS 可用于寻找潜在靶向 / 免疫治疗靶点（推荐等级：R）。
    
2. 检测流程规范
   • 检测前须签署知情同意，明确检测目的、局限性（如灵敏度、特异度、报告范围）及遗传咨询（推荐等级：SR）。
   • 样本优先选新鲜肿瘤组织（甲醛固定石蜡包埋 FFPE 也可），肿瘤细胞含量≥20%，DNA 浓度≥50ng/μL、总量≥1μg，RNA 需保证完整性。
   • 推荐 DNA+RNA 联合测序，互补检测基因突变、扩增、融合等，提升变异检出率。
    
3. 临床应用价值
   表格

   应用方向	关键内容	推荐要点
   辅助诊断	鉴别诊断、精准分型，如 EWSR1 融合诊断尤文肉瘤，MDM2 扩增诊断脂肪肉瘤等	优先用 NGS 进行多标志物并行检测（SR）
   治疗指导	寻找可靶向变异，如 CDK4/6 抑制剂用于 CDK4 扩增的脂肪肉瘤；帕博利珠单抗用于 dMMR/MSI-H 的恶性骨肿瘤（骨巨细胞瘤除外）	仅在无标准方案时用于寻找潜在靶点（R）
   预后评估	TP53 突变提示骨肉瘤预后差；IDH1/IDH2 突变提示 Ⅱ-Ⅲ 级软骨肉瘤预后较好；14q32 改变提示 Ⅲ 级软骨肉瘤预后差等	作为预后分层参考（R）

    
4. 报告解读与质控
   • 报告应包含患者信息、检测项目、基因变异列表、临床意义、局限性等，变异需分级标注（ pathogenic/likely pathogenic/uncertain significance/likely benign/benign）。
   • 建议组建分子肿瘤专家委员会（MTB），结合临床与病理综合解读，避免过度解读 VUS（意义未明变异）。
   • 实验室需通过室间质评，建立标准操作流程（SOP），定期验证检测灵敏度、特异度及重复性。
    

核心技术要点

• 平台选择：优先捕获测序（Panel），覆盖骨肿瘤常见驱动基因（如 TP53、MDM2、CDK4、EWSR1 等）及融合基因；必要时全外显子（WES）或全基因组（WGS）。
• 生物信息分析：需过滤胚系变异，保留体细胞变异；融合基因需用 STAR、TopHat 等工具比对，并用 Sanger 测序验证。
• 局限性说明：NGS 可能漏检低丰度变异，无法检测部分表观遗传改变；VUS 比例较高，需谨慎解读。

与其他共识的区别

• 聚焦骨原发肿瘤，而非骨与软组织肿瘤的通用共识，对骨肉瘤、软骨肉瘤、尤文肉瘤等亚型的分子特征与推荐更具体。
• 强调 RNA 测序在融合检测中的必要性，弥补 DNA 测序不足，提升临床可操作性。