一、引言
Y 染色体微缺失是导致男性不育的常见遗传因素之一。准确的分子诊断对于评估男性生育能力、遗传咨询及制定合理治疗方案至关重要。欧洲男科学会（EAA）与欧洲分子遗传质量网络（EMQN）联合发布 2023 年实践指南，旨在规范 Y 染色体微缺失的分子诊断流程，提高诊断准确性与可靠性。
二、Y 染色体微缺失概述
Y 染色体结构与功能：Y 染色体包含与男性性别决定和生殖功能相关的基因。其中，无精子症因子（AZF）区域对精子发生起关键作用，该区域分为 AZFa、AZFb 和 AZFc 三个亚区，每个亚区包含多个与精子生成有关的基因。
微缺失类型及影响：Y 染色体微缺失主要指 AZF 区域的缺失，不同亚区缺失会导致不同程度的精子发生障碍。AZFa 缺失通常导致严重的少精子症或无精子症，睾丸活检常表现为唯支持细胞综合征；AZFb 缺失同样可致严重精子生成障碍，睾丸活检可见精子发生阻滞在减数分裂期；AZFc 缺失最为常见，患者精子数量可从无精子症到严重少精子症不等，部分患者在青春期后精子数量可能进行性减少。
三、检测指征
无精子症患者：无论睾丸体积大小，均应进行 Y 染色体微缺失检测，以明确病因，为后续治疗（如辅助生殖技术）提供遗传信息。
严重少精子症患者：精子浓度低于 5×10⁶/ml 的患者，建议检测 Y 染色体微缺失，因其可能存在遗传因素导致的精子生成障碍。
隐睾症患者：隐睾可影响睾丸发育和精子生成，此类患者也应考虑进行 Y 染色体微缺失检测，以评估遗传风险。
具有男性不育家族史患者：家族中存在其他男性不育病例，提示可能存在遗传因素，进行 Y 染色体微缺失检测有助于明确病因和遗传模式。
四、检测技术
聚合酶链反应（PCR）
多重 PCR：是目前检测 Y 染色体微缺失的常用方法。选择覆盖 AZF 区域的多个特异性引物，同时扩增多个位点，通过电泳分析扩增产物判断是否存在缺失。例如，可选择位于 AZFa、AZFb 和 AZFc 亚区的标志性基因位点，如位于 AZFa 的 USP9Y、位于 AZFb 的 RBMY1A1 以及位于 AZFc 的 DAZ 基因家族等。
优点：操作相对简便、成本较低，可同时检测多个位点，适合大规模筛查。
缺点：对低水平嵌合缺失或复杂结构变异检测能力有限，可能出现假阴性结果。
荧光原位杂交（FISH）
原理：使用针对 Y 染色体特定区域的荧光标记探针，与间期细胞核或中期染色体进行杂交，通过荧光显微镜观察荧光信号，判断相应区域是否缺失。
优点：可直观观察到 Y 染色体特定区域的缺失情况，对于一些 PCR 难以检测的复杂结构变异有独特优势，同时可检测嵌合缺失。
缺点：通量较低，一次只能检测有限的几个位点，对样本质量要求较高，且操作相对复杂，需要专业技术人员。
二代测序（NGS）
全外显子测序（WES）或全基因组测序（WGS）：可全面检测 Y 染色体上的基因变异，包括微缺失、单核苷酸变异等。
优点：能发现新的或罕见的 Y 染色体变异，提供更全面的遗传信息，尤其适用于常规 PCR 检测阴性但高度怀疑 Y 染色体微缺失的患者。
缺点：成本较高，数据分析复杂，需要专业的生物信息学支持，且对低水平嵌合缺失的检测灵敏度也有待提高。
五、检测流程
样本采集
血液样本：常用静脉血，采集 5 - 10ml，置于含有抗凝剂的采血管中，避免溶血。
精液样本：对于无精子症患者，若血液样本检测结果不明确或怀疑存在生殖细胞特异性缺失，可采集精液样本。采集前需禁欲 2 - 7 天，通过手淫法采集完整精液标本。
样本处理与核酸提取
血液样本：离心分离血浆和血细胞，提取白细胞中的基因组 DNA，可使用商品化的 DNA 提取试剂盒，按照说明书操作。
精液样本：液化后离心收集精子，采用合适的方法破膜释放精子 DNA，再进行提取。注意避免精液中杂质对 DNA 提取的影响。
检测操作
PCR 检测：根据所选引物进行 PCR 反应，设置合适的反应体系和循环参数。反应结束后，通过琼脂糖凝胶电泳或毛细管电泳分析扩增产物，判断是否存在 Y 染色体微缺失。
FISH 检测：制备染色体或细胞涂片，进行预处理后与荧光标记探针杂交，经过洗涤、复染等步骤，在荧光显微镜下观察并分析结果。
NGS 检测：对提取的 DNA 进行文库构建，然后进行测序。测序数据经过质量控制、比对、变异检测等生物信息学分析流程，判断 Y 染色体微缺失情况。
结果报告
报告内容：应包含患者基本信息、样本类型、检测方法、检测结果及结果解释。对于检测到的 Y 染色体微缺失，需明确缺失的亚区、具体位点及可能对生育的影响。
报告规范：使用标准化术语和格式，确保报告内容准确、清晰、易懂。例如，对于缺失类型的描述应符合国际公认的命名规则，便于临床医生理解和应用。
六、质量控制
室内质量控制
仪器设备校准：定期对 PCR 仪、测序仪、荧光显微镜等仪器设备进行校准和维护，确保仪器性能稳定。例如，PCR 仪需定期校准温度准确性，测序仪需检查测序质量指标。
试剂质量验证：对检测所用试剂（如引物、探针、DNA 提取试剂盒等）进行质量验证，确保其灵敏度、特异性和稳定性。每批次试剂使用前应进行性能测试，合格后方可使用。
阳性与阴性对照设置：每次检测均应设置阳性和阴性对照。阳性对照采用已知存在 Y 染色体微缺失的样本，阴性对照采用正常男性样本或无核酸的空白样本。通过对照结果判断检测过程是否正常，避免假阳性或假阴性结果。
内部质量审核：定期对检测结果进行内部审核，由经验丰富的专业人员对报告进行复查，确保结果准确无误。同时，对检测过程中的原始数据、实验记录等进行保存和审查，便于追溯和分析。
室间质量评价
参与权威机构组织的质评活动：积极参加 EAA、EMQN 或其他权威机构组织的室间质量评价活动，与其他实验室进行检测结果比对。
结果分析与改进：对室间质评结果进行深入分析，若出现不满意结果，应查找原因，如检测方法、操作流程、试剂质量等方面的问题，并及时采取改进措施，不断提高检测质量。
七、遗传咨询与临床管理
遗传咨询
检测前咨询：向患者解释 Y 染色体微缺失检测的目的、意义、检测方法及可能结果，告知检测可能带来的心理、社会影响，如对生育期望的改变、遗传风险传递等。同时，解答患者关于检测流程、费用等方面的疑问，帮助患者做出知情决策。
检测后咨询：根据检测结果，向患者详细解释 Y 染色体微缺失的类型、对生育的影响以及遗传模式。对于有生育需求的患者，提供辅助生殖技术（如卵胞浆内单精子注射，ICSI）的相关信息，包括成功率、风险及可能传递给子代的遗传风险等。同时，给予患者心理支持和指导，帮助其应对检测结果带来的心理压力。
临床管理
治疗方案制定：对于 Y 染色体微缺失导致的不育患者，根据缺失类型和患者具体情况制定个体化治疗方案。对于 AZFc 缺失患者，若睾丸内存在精子，可考虑通过 ICSI 技术辅助生育；而对于 AZFa 或 AZFb 缺失患者，由于精子生成严重障碍，可能需要考虑使用供精或领养等方式。
子代遗传风险评估与监测：通过 ICSI 技术生育的子代存在遗传父亲 Y 染色体微缺失的风险。因此，应对子代进行遗传监测，在适当年龄进行 Y 染色体微缺失检测，以便早期发现问题并采取相应措施。同时，为患者提供遗传咨询和教育，使其了解子代遗传风险及预防措施。