一、引言
微卫星不稳定性（MSI）是指由于 DNA 错配修复（MMR）功能缺陷，导致微卫星（MS）重复序列长度发生改变的现象。MSI 在肿瘤发生发展中起重要作用，尤其与结直肠癌、子宫内膜癌等多种肿瘤的发生、治疗及预后密切相关。准确检测 MSI 对指导临床治疗、评估预后具有重要意义。为规范 MSI 检测技术在临床实践中的应用，提高检测质量，特制定本专家共识。
二、MSI 检测的临床意义
肿瘤诊断与分型：在结直肠癌中，约 15% 表现为 MSI - H（高度微卫星不稳定），与散发性结直肠癌相比，MSI - H 型结直肠癌具有独特的临床病理特征，如多发生于右半结肠，分化程度低，淋巴细胞浸润明显等。在子宫内膜癌中，MSI - H 型也具有特定的病理特点，有助于肿瘤的精准分型。
指导免疫治疗：MSI - H 肿瘤细胞由于基因突变累积，产生大量新抗原，易被免疫系统识别，对免疫检查点抑制剂治疗高度敏感。如在结直肠癌、胃癌等多种实体瘤中，MSI - H 患者接受免疫治疗的疗效显著优于 MSI - L（低度微卫星不稳定）或 MSS（微卫星稳定）患者。因此，检测 MSI 状态可筛选出可能从免疫治疗中获益的患者，实现精准治疗。
预后评估：一般而言，MSI - H 型结直肠癌患者预后相对较好，5 年生存率较高。但在其他肿瘤中，MSI 与预后的关系可能因肿瘤类型而异。例如，在子宫内膜癌中，MSI - H 与预后的关系尚不明确，需进一步研究。
三、MSI 检测技术
PCR - 毛细管电泳法
原理：选择多个微卫星位点，设计特异性引物进行 PCR 扩增。正常组织与肿瘤组织中微卫星位点的扩增片段长度若存在差异，提示 MSI。通过毛细管电泳分离扩增产物，根据峰图分析片段长度变化。
常用位点：美国国家癌症研究所（NCI）推荐的 Bethesda 标准位点，包括 5 个单核苷酸重复位点（BAT - 25、BAT - 26、NR - 21、NR - 24、MONO - 27），其中 BAT - 26 位点具有较高敏感性和特异性。此外，还有 Promega 公司推荐的 Panel，包含 5 个单核苷酸重复位点（BAT - 25、BAT - 26、NR - 21、NR - 24、NR - 27）。
结果判断：出现 2 个或以上位点不稳定，判定为 MSI - H；仅 1 个位点不稳定，为 MSI - L；无位点不稳定，为 MSS。
优点：成本相对较低，技术成熟，广泛应用，可直观显示扩增片段长度变化。
缺点：需配对正常组织样本对比，难以检测低水平 MSI，对样本质量要求高，易受 PCR 扩增偏倚影响。
免疫组化法（IHC）
原理：MMR 蛋白表达缺失提示 MSI。常用抗体检测 MLH1、MSH2、MSH6 和 PMS2 这 4 种 MMR 蛋白表达。若肿瘤细胞中一种或多种 MMR 蛋白表达缺失，可能存在 MSI。
结果判断：细胞核出现棕黄色染色为阳性表达，无染色为表达缺失。任何一种 MMR 蛋白表达缺失，提示可能为 MSI - H；4 种蛋白均正常表达，多为 MSS。但需注意，部分 MSI - H 肿瘤 MMR 蛋白表达可能正常，存在假阴性。
优点：操作相对简便，可同时观察肿瘤组织形态学，对样本质量要求低于 PCR 法，无需配对正常组织。
缺点：不能直接检测 MSI，无法区分 MSI - H 和 MSI - L，部分 MMR 蛋白表达正常的肿瘤可能存在 MSI，导致假阴性。
二代测序（NGS）法
原理：对肿瘤样本进行高通量测序，分析微卫星区域序列变化，检测 MSI 状态。可同时检测多个微卫星位点，还能获取基因突变、拷贝数变异等其他信息。
结果判断：通过生物信息学算法计算微卫星不稳定评分，与阈值比较判断 MSI 状态。不同算法和数据库可能导致结果差异，需选择可靠分析方法。
优点：无需配对正常组织，可检测低水平 MSI，同时提供肿瘤全面分子信息，有助于综合分析。
缺点：成本高，数据分析复杂，需专业生物信息学知识和高性能计算设备，不同平台和算法结果一致性待提高。
四、检测流程与质量控制
样本采集与处理
样本类型：常用肿瘤组织样本，包括手术切除、活检组织。对于无法获取肿瘤组织患者，可考虑液体活检样本，如外周血 ctDNA，但检测敏感性可能低于组织样本。
样本处理：组织样本离体后尽快固定于 10% 中性缓冲福尔马林，固定 6 - 48 小时，石蜡包埋、切片。注意固定时间过长或过短可能影响检测结果。
检测流程
PCR - 毛细管电泳法：提取肿瘤与正常组织 DNA，进行 PCR 扩增，产物经毛细管电泳分离，分析峰图判断结果。
免疫组化法：切片脱蜡、水化，抗原修复，加一抗、二抗孵育，显色，显微镜下观察结果。
NGS 法：提取肿瘤组织 DNA，文库构建，测序，生物信息学分析判断 MSI 状态。
质量控制
室内质量控制：定期校准仪器，如 PCR 仪、测序仪等。使用合格试剂，定期进行性能验证。每次检测设阴阳性对照，监测检测过程准确性。
室间质量评价：积极参加权威机构组织的室间质评活动，如美国病理学家协会（CAP）、欧洲分子基因诊断质量联盟（EMQN）等组织的 MSI 检测室间质评。对室间质评结果分析总结，改进检测流程。
五、不同检测技术的选择与联合应用
检测技术选择
临床疑似结直肠癌、子宫内膜癌等肿瘤，初筛可优先考虑 IHC 法，操作简便且能观察组织形态。
需精准判断 MSI 状态，尤其是考虑免疫治疗时，PCR - 毛细管电泳法或 NGS 法更合适。PCR - 毛细管电泳法成本较低、技术成熟；NGS 法可提供更多分子信息。
对于无法获取肿瘤组织样本，或需动态监测 MSI 状态患者，可尝试基于 ctDNA 的 NGS 检测，但需注意其局限性。
联合应用
IHC 与 PCR - 毛细管电泳法联合：IHC 结果提示 MMR 蛋白表达缺失，用 PCR - 毛细管电泳法验证，提高检测准确性。
IHC 与 NGS 法联合：IHC 初筛后，NGS 法进一步分析 MSI 状态及其他分子特征，为临床治疗提供全面信息。
六、MSI 检测结果解读与报告
结果解读
MSI - H：提示可能从免疫治疗获益，结直肠癌患者预后相对较好，但不同肿瘤类型有差异。
MSI - L 和 MSS：对免疫治疗可能不敏感，需结合其他因素制定治疗方案。
报告内容
患者基本信息：姓名、性别、年龄、样本类型、送检科室等。
检测方法：明确采用的检测技术，如 PCR - 毛细管电泳法、IHC 法或 NGS 法。
检测结果：MSI 状态（MSI - H、MSI - L 或 MSS），若为 IHC 法，需报告 MMR 蛋白表达情况。
结果解释：简要说明 MSI 状态临床意义，如对治疗和预后的影响，提供相关参考建议。