小动物视觉电生理数据采集操作规范指南（2025）要点解读

来源：国内多中心眼科‑视觉生理专家组，2025，适用小鼠、大鼠、豚鼠、兔；包含闪光视网膜电图 FERG、振荡电位 OPs、明适应 ERG、闪光视觉诱发电位 FVEP；目标实现实验可重复、组间可比，减少噪声、伪影，统一报告标准。

一、适用仪器、环境与动物伦理

仪器配置

1. 成套视觉电生理系统（Ganzfeld 全视野闪光刺激器），屏蔽接地的法拉第屏蔽笼（Faraday 笼），必须接地良好，降低工频 50Hz 市电干扰。
2. 角膜环形金 / 铂电极（ERG 记录）；皮下针状参考、接地电极；信号放大器、采集软件；照度校准的闪光刺激系统。
3. 前置条件：实验前完成光强校准、时间校准；同批次实验全部动物保持刺激参数不变。

环境条件

1. 暗室 / 不透光实验舱；暗适应全程仅允许深红色安全照明（＞620 nm 红光），禁止白光、电脑屏幕白光泄露干扰视网膜暗适应状态PMC。
2. 屏蔽笼外壳可靠接地；环境温度 22‑26 ℃；动物恒温加热平台恒定 37.0‑37.5 ℃。

动物伦理

• 遵循实验动物伦理委员会审批；遵循 3R 原则；麻醉、术后保温复苏；实验结束按伦理方案处置动物。

二、动物术前准备（指南强推荐 Grade‑1）

1. 暗适应（暗适应 ERG 核心前提）

• 标准化暗适应：12 h 避光暗适应；最低不少于 4 h；推荐过夜 12 h；动物置于完全避光暗箱；仅红光下转运动物，暗适应不足直接造成 a‑/b‑波振幅偏低、结果不可信。

2. 麻醉与体温维持

1. 麻醉两种方案：
   • 吸入麻醉：异氟烷（1.5‑2.5%），循环持续吸入，生命体征平稳，优先推荐；
   • 腹腔注射：戊巴比妥钠 / 氯胺酮‑赛拉嗪复合麻醉；严格按体重换算剂量。

⚠️麻醉后极易低体温；全程 37‑37.5 ℃恒温加热垫，体温下降会直接压低 ERG 波形、延长潜伏期，是最常见实验失败诱因PMC。

3. 散瞳与角膜保护

1. 散瞳：复方托吡卡胺（1% 托吡卡胺 + 2.5% 去氧肾上腺素）滴眼液双眼各 1‑2 滴，等待 5‑10 min 瞳孔充分开大；实验过程中瞳孔回缩需补滴散瞳药。
2. 角膜保护：卡波姆 / 透明质酸钠眼用凝胶，薄而均匀涂布角膜表面，改善电极‑角膜导电接触；凝胶不能过厚，厚胶会造成光学畸变、信号衰减，建议定量滴加，组间用量保持一致。

三、电极放置标准（Grade‑1 强推荐）

①闪光视网膜电图 F‑ERG

• 记录电极（正极）：环形角膜电极，轻柔贴合角膜顶点，不压迫眼球；
• 参考电极（负极）：皮下针电极，脸颊皮下；
• 接地电极：尾部皮下（尾部根部）；

禁止电极直接刺入眼球、眼睑；导线保持松弛，避免牵拉造成基线漂移、运动伪影。

②闪光视觉诱发电位 FVEP（检测视神经‑视皮层通路）

• 记录电极：枕叶对应头皮皮下；
• 参考电极：脸颊皮下；
• 接地：尾部皮下；

做 VEP 时不能把 ERG 角膜电极当成 VEP 记录电极。

注意：全部电极导线整理收拢，远离加热垫电源线，减少工频耦合噪声。

四、标准化采集流程

1. 基线确认

动物就位、电极安放完成后，等待基线平稳 2‑3 min；观察基线噪声水平；50Hz 工频干扰过大，重新检查屏蔽笼接地、电极接触。

2. 暗适应（暗视）ERG（Scotopic‑ERG）

1. 暗视系列闪光：从弱光逐步递增闪光强度；记录a 波（光感受器）、b 波（Müller 细胞 / 双极细胞）、振荡电位 OPs。
2. 刺激范式：多重梯度光强（log cd・s/m²）；每个光强多次重复叠加平均，减少随机噪声；弱光增加叠加次数，强光减少叠加。
3. 振荡电位 OPs：暗适应条件下，高强度闪光，高通滤波提取 OP 子波。

3. 明适应 ERG（Photopic‑ERG，视锥细胞功能）

1. 动物先做5‑10 min 明适应背景光（30 cd/m² 背景照明），抑制视杆细胞；
2. 在恒定背景光之上叠加闪光刺激，记录视锥细胞主导的 ERG 反应。

4.FVEP 闪光视觉诱发电位

• 闪光刺激，多次信号叠加平均；记录N1、P1 波潜伏期、振幅；
• VEP 信号幅度远小于 ERG，必须增加叠加次数提高信噪比。

采集参数记录：带通滤波 0.3‑300 Hz；采样率≥1 kHz；全部参数同一批实验固定不变，不中途修改增益、刺激强度。

五、合格波形判定与废片剔除标准

✅合格记录

1. 基线平稳，无大幅漂移；
2. a 波、b 波波形轮廓清晰可分辨；OPs 子波可分辨；
3. 无 50Hz 工频大干扰、无运动抖动伪影；
4. 角膜电极位置稳定，没有滑脱移位。

❌直接舍弃该组数据

1. 基线漂移严重，波形不断上下漂移；
2. 电极滑脱、角膜干燥浑浊；
3. 噪声过大，信噪比过低，波形淹没在噪声内；
4. 动物体温过低、麻醉深度不足，动物抽动抖动。

六、数据存储、命名与报告规范

1. 原始文件保存原始二进制 / 原始采集格式，不只用图片截图；原始数据不做过度后期人为修饰。
2. 文件命名：动物编号‑品系‑周龄‑眼别‑实验日期‑模式（暗视ERG/明视ERG/VEP）。
3. 实验记录必须完整记录：
   • 动物品系、周龄、体重；
   • 暗适应总时长、麻醉方式；
   • 刺激器光强梯度、叠加次数、滤波参数；
   • 体温；每只动物 a 波振幅、b 波振幅、潜伏期；VEP 的 N1/P1 潜伏期、幅值。

论文报告必须写明：设备型号、暗适应时长、麻醉方案、刺激光强、叠加平均次数、滤波带宽。

七、常见故障、伪影与排查

表格

现象	主要原因	处理方案
整体波形幅度普遍偏低	暗适应不足、体温低、角膜凝胶太厚	保证 12h 暗适应；检查加热垫温度；减少凝胶厚度
基线大幅度漂移	电极接触不良、导线牵拉、动物微动	重新安放电极；导线松弛固定；加深麻醉
50 Hz 周期性正弦干扰	屏蔽笼未接地，电源线靠近电极导线	检查法拉第笼接地；远离电源线；整理导线走向
OPs 分辨不清	信噪比低	增加叠加平均次数，调整高通滤波参数
VEP 几乎看不到波形	叠加次数不足、电极位置偏移	增加叠加次数，重新调整枕部记录电极位置

八、术后动物处理

记录结束，轻柔取下角膜电极；角膜滴营养保护凝胶；动物继续保温，直到完全苏醒，再放回饲养笼；出现角膜损伤，局部眼表药物处理。

九、指南核心速记要点

1. 两大关键前提：充分暗适应（推荐 12 h）+ 全程稳定体温 37‑37.5 ℃；低温、暗适应不足直接导致数据失效。
2. 电极规范：ERG 角膜环形电极；参考脸颊皮下，接地尾部皮下；法拉第屏蔽笼良好接地，减少工频干扰。
3. 测试序列：先暗视（暗适应）ERG，后明视 ERG（需要背景光抑制视杆）；VEP 需要多次叠加平均。
4. 原始数据保留原始文件，不只用截图；同一批次全部实验动物刺激、放大、滤波参数固定不变。
5. 常见失败诱因：体温下降、暗适应时间不足、凝胶过厚、接地不良引入 50Hz 市电噪声。
6. 报告应完整披露动物、麻醉、暗适应时长、刺激与叠加参数，保证研究可重复