一、 试剂配方： 1X TBS: Tris-base 12.11g Nacl 8.775g 用HCl 调pH7.4，用纯水稀释至1L 5X Transfer buffer: Tris-base 15.1g Glycine 72.0g To 1 L 10X碱性磷酸酶缓冲液： 1 mol/L Tris-HCl pH 9.5 1 mol/L Nacl 50mmol/L MgCl2 TTBS：1XTBS +TWEEN20（1000...

组织印迹的Western杂交 在硝酸纤维素膜上制备组织印迹 1．在塑料板上放置两层Whatman 1号滤纸，在滤纸上方放上一张普通纸，然后铺上一层硝酸纤维素膜。 2．用双面刀片从植物组织如大豆的茎上切取一块切片（厚度约为 1mm）。如果组织表面是湿的，则在Kimwipes...

第二部分：免疫印迹染色 [仪器、材料与试剂] (一)仪器与器具 1．电泳仪(要求为大电流低电压) 2．电泳转移槽及转移夹 3．水平摇床 4．小塑料盒 5．镊子 6．搪瓷盘 (二)材料 1．醋酸纤维膜 2．滤纸 3．一次性塑料手套 (三)试剂 1．转移电泳缓冲液 25mmo1／L Tri...

[实验原理] 免疫印迹（Western blotting 或 Immunoblotting）一般由凝胶电泳、样品的印迹和免疫学检测三个部分组成。第一步是做SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，使待测样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶中分成带。第二步把凝胶中已分成条带的蛋白质转移到一种固相支持...

试剂配制 （一）母液 1.0mol/L TrisHCl Tris (MW121.14) 30.29g 蒸馏水 200ml 溶解后，用浓盐酸调pH至所需点（见下所示），最后用蒸馏水定容至250ml，高温灭菌后室温下保存。 PH HCl 7.4 约17ml 7.5 约16m 7.6 约15ml 8.0 约10ml 1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF PM...

Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 实验原理 与Southern或 Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯...

（三） SDS－PAGE电泳 （1） 清洗玻璃板： 一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。 （2） 灌胶与上样 1、玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。（操作时要使两玻璃...

10X丽春红染液 丽春红S 2g 三氯乙酸 30g 磺基水杨酸 30g 蒸馏水至 100ml 使用时将其稀释10倍。 TBS缓冲液（100mmol/ L Tris?HCl pH7.5,150mmol/L NaCl） 1 mol/ LTrisHCl（pH7.5） 10ml NaCl 8.8g 蒸馏水至 1000ml TBST缓冲液（含 0.05％Tween20的TBS缓冲液）...

这种技术是把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测之。 Western使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。这种技术的作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物...

一、提取抗原蛋白 将提取RNA途中留存的样品，加入150l100%酒精充分混匀，静置 5min(RT),2000g,4℃离心5min,吸取上清至新管中,加入750l异丙醇,混匀,静置10min(RT),12000g,4℃离心 10min,弃上清,加入1ml0.3mol/L盐酸胍/95%酒精重悬沉淀,用加样器打散沉淀,混旋20...