一、实验原理：2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离，第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同，而将一向分离后的蛋白进一步分离。这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。 二、实验步骤： 1. 样品的溶解 取纯化后的晶体蛋白3.0mg，...

我们本次实验使用的是银染。银染的方法种类很多，目前有文献报道的就有100多种。但是其准确的染色机制还不是特别的清楚。大致的原理是银离子在碱性pH环境下被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上而显色。 由于银染的灵敏度很高，可染出胶上低于1 ng/蛋白质点...

六、第二向 SDS-PAGE 1．[基本原理] 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。如果加入一种试剂消除电荷、形状等因素的影响，使电泳迁移率只取决于分子的大小，就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。1967年...

由于合成载体两性电解质（synthetic carrier ampholyte SCA）是通过复杂的合成过程得到的，其重复性很难控制，由此不同批次之间会存在很大的变化，同一蛋白质在不同批 图-1. 等电聚焦的聚焦效应 次等电聚焦中所出现的位置有所偏差，这样作为双向电泳中的一向...

2．[操作步骤] 1. 将标准品BSA(5mg/ml)先稀释成0.5 mg/ml， 2. 按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20l分别加到96孔板中，加DDW补足到20l。 3. 加适当体积样品（4l）到96孔板的样品孔中，加DDW到20l。 4. 各孔加入200l G-250染色液，室温放置3-5分钟。 5. 用酶标仪测定...

2．[操作步骤] 1. 将研磨管离心一分钟（不低于12000g）弃上清。 2. 加入裂解液（200-300ul）充分vortex. 3. 再加入样品鼠脑组织（低于100mg）充分研磨。然后可以再加入裂解液至1ml.. 4. 将组织悬液离心5-10min(高于12000g)去除树脂和细胞碎片。 5. 收集上清...

一、蛋白质组学概论 随着人类基因组计划的实施，生命科学步入了后基因组时代，出现了不同于以往经典生物实验科学的全新的研究方式─生物大科学。这种生物大科学的核心思想是整体性研究，即以生物体内某类物质为对象进行完整的研究。过去对生命活动的研究仅限...

二、一向电泳（13cm的holder） （1）取大约70-100ng的蛋白与溶胀液混合总体积达到250vl （2）将上述溶液加到holder 的两个电极之间。 （3）去掉胶条的保护膜，胶面朝下，先将胶条尖端朝胶条槽的尖端方向放入胶条槽中，慢慢下压胶条，并前后移动，避免生成气泡...

2.3.2 第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） 选用DYY-Ⅲ型（北京六一仪器厂生产）电泳槽（规格为2002001mm），分离胶浓度为12%，无浓缩胶。待胶聚合后，将电聚焦后已经平衡的胶条平放于浓缩胶顶端（避免胶条拉直），并用1%琼脂糖（电极缓冲液配制）封胶...

双向电泳IEF （sigma）IEF（not IPG）/SDS-PAGE最简单的装备推荐如下，适合于没多少money做IPG又想做热的所谓蛋白质组的，嘻嘻！ IEF用Biorad的圆盘电泳槽（不行用国产的吧，不推荐），SDS-PAGE用六一厂的就可以了（ft，六一厂应该给我money吧，给你做广告了...