一、两栖纲 蛙与蟾蜍与人类的关系疏远、个体...
一.实验步骤 1. 组织块称重 2. 利用液氮、研钵粉碎组织块 3. 加入RIPA缓冲液（每克组织3 ml RIPA），PMSF（每克组织30l，10 mg/ml PMSF），利用Polytron进一步匀浆（15,000转/分*1分钟）维持4℃ 4. 加入PMSF（每克组织30l，10 mg/ml PMSF），冰上孵育30分钟 5...
首先讲转膜仪的清洗： Do not immerse the unit in liquid. Use special care when cleaning the anode plate to avoid scratching or marring the platinum. Do not use abrasives or strong detergents. The cathode plate (stainless steel) can be cleane...
（2）间接法： 细胞3％多聚甲醛固定和渗透化封闭针对蛋白的特异抗体洗涤荧光素标记的二抗洗涤 荧光显微镜观察或流式细胞计分析 凋亡相关蛋白TFAR19蛋白的表达和细胞定位分析 TFAR19（PDCD5）是由本研究室在国际上首先报导的一个拥有自己知识产权的人类新基因...
2 类型 （1）间接法测抗体 间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体，检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。 常用于临床血清中自身抗体的检测，以及杂交瘤上清特异性抗体的筛...
一 Western Blot 1 原理： 将通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或PVDF膜上，然后与能特异性识别待检蛋白的抗体进行反应，洗涤去除没有结合的特异性抗体后，加入标记的、能识别特异性抗体的种属特异性抗体，反应一段时间后再次洗涤去除非特...
WB 过程中常见的问题及可能原因分析 问题 可能原因 验证或解决办法 转膜不充分 膜没有完全均匀湿透 使用100% methanol浸透膜 靶蛋白分子量小于10,000 选择小孔径的膜，缩短转移时间 靶蛋白等电点等于或接近转移缓冲液pH 值 可尝试使用其他缓冲液如CAPS缓冲液...
(一)原理 Western blot是一种在PVDF或硝酸纤维素（NC）膜上进行的抗原抗体反应。蛋白电泳后，将蛋白转移至膜上，再与特异性抗体孵育，洗去游离的抗体，然后和酶标记的二抗孵育，再进行底物显色。由于抗原抗体反应特异性好，亲合力高，Western blot检测的灵敏...
1. 30%储备胶溶液： 丙烯酰胺（Acr） 29.0g 亚甲双丙烯酰胺（Bis） 1.0g 混匀后ddH2O，37℃溶解，定容至100ml，棕色瓶存于室温。 2. 4分离胶缓冲液（1mol/L Tris-HCl PH 8.8） Tris 18.17g加ddH2O溶解，浓盐酸调PH 8.8，定容至100ml。 3. 4浓缩胶缓冲液（0.5m...
免疫印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（western blot），它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹（western blot）具有SDS-PAGE的...