[试剂主要] 1．CSB缓冲液：42mM柠檬酸钠；0.83% N-lauryl sarcosine(十二烷基，N甲基甘氨酸钠)；0.2 mM -巯基乙醇。 2．变性液：异硫氰酸胍（终浓度 4 M）25g、CSB缓冲液 33ml，混合直至完全溶解，可在65℃助溶。4℃保存备用。 3．2 M乙酸钠：pH 4.0。 4．异...

[实验原理] 真核细胞的mRNA分子最显著的结构特征是具有5端帽子结构（m7G）和3端的Poly(A)尾巴。绝大多数哺乳类动物细胞mRNA的3端存在20-30个腺苷酸组成的Poly（A）尾，通常用Poly（A+）表示。这种结构为真核mRNA的提取，提供了极为方便的选择性标志，寡聚（dT...

RNA是基因表达产物，由以下几类分子组成，rRNA（占细胞总RNA的80%～85%）、tRNA和核内小分子RNA（占10～15%）、mRNA（占1～5%）。其中mRNA是分子生物学的主要研究对象，分离制备mRNA是克隆基因，分析基因表达以及建立cDNA文库的首要步骤。 真核细胞总RNA分离...

从总RNA中分离mRNA 采用Promega公司的PolyATract mRNA Isolation System III。 使用该试剂盒，mRNA产量极低，因此下述方法是以Promega公司试剂盒操作手册为基础，并采用储昭晖硕士(作物遗传改良国家重点实验室植物分子生物学水稻分室)所建议的改进方法综合而...

3， 稍离心 4， 100℃沸水浴1分钟 5， 趁热加入Tag酶0.5ul（冰上操作） 6， 再加入50ul液体石蜡封闭 7， 10000rmp离心1分钟 8， PCR条件 94℃ 1min 58℃ 50sec 72℃ 1min30sec 进行40个循环，然后72℃ 10min 完后4℃保温。 9，10000rmp离心5min 10，将下层水...

逆转录（RT） 一，准备工作 1， 实验器具与材料： （1）移液枪：200ul、10ul （2）吸头：200ul、20ul （3）EP 管1.5ml、100ul （4）水浴箱 2，实验器具的处理与准备 塑料制品：（包括吸头、EP管等） 将塑料制品逐个浸泡于 1DEPC水中（必要时小枪头需要用吸管...

RNA抽提 一，准备工作 1， 实验器具与材料： （1） 移液枪：1ml、200ul、10ul （2） 吸头：1ml、200ul、20ul （3） 吸头台：放置1ml吸头的一个，放置200ul和20ul的吸头一个 （4） EP管1.5ml、100ul （5） 玻璃研磨器 （6） 容量瓶：1000ml （7） 盐水瓶：100m...

【实验原理】 Trizol 试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA 的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA 的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA 可以通过异丙醇沉淀获得。 【实验仪器】 1. 匀浆机 2. 低...

真核细胞的mRAN是单顺反子，其最显著的特征是具有５端帽子结构和3端的poly A的结构，此poly A结构为mRNA的提取提供了有效的途径，人们利用碱基配对原理，采用寡聚Ｔ结构作为亲和柱材料，当含mRNA的总RNA样品流经寡聚Ｔ柱时，mRAN即被特异性的结合到柱上，从而...

一、实验目的 通过本实验学习从植物组织中提取RNA的方法 二、实验原理 RNA是一类极易降解的分子，要得到完整的RNA，必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓度强变性剂异硫氰酸胍，可溶解蛋白质，破坏细胞结构，使核蛋白与核...