3.3 引物、探针的纯度和稳定性 定制引物的标准纯度对于大多数PCR应用是足够的。部分应用需要纯化，以除去在合成过程中的任何非全长序列。这些截断序列的产生是因为DNA合成化学的效率不是100％。这是个循环过程，在每个碱基加入时使用重复化学反应，使DNA从3到...

2.3TaqmanMGB探针设计介绍 MGB探针的优点： MGB探针较短(14-20bp)，更容易找到所有排序序列的较短片段的保守区。 短片段探针(14-20bp)加上MGB 后，Tm值将提高10℃，更容易达到荧光探针Tm值的要求。 MGB探针的设计原则 探针的5端避免出现G，即使探针水解为单个...

第一部分 一、基本步骤： 1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对； 2、引物、探针的设计； 3、引物探针的合成； 4、反应体系的配制； 5、反应条件的设定； 6、反应体系和条件的优化； 7、荧光曲线和数据分析； 8、标准品的制备； 二、技术关键： 1、目的基因...

很早就有用随机引物的PCR，但由于无法有效地控制由随机引物引发的非特异产物的产生，所以一直未能广泛应用。近年来由IJiu等设计的TAIL- PCR(Termal Asymmetric Interlaced PCR)又叫热不对称交错PCR，则解决了这个问题，后来有研究表明，经改良过的TAIL-PCR成...

【实验目的】 1．了解PCR-DHPLC技术的原理。 2．了解并熟悉PCR-DHPLC技术的步骤。 【实验原理】 DHPLC技术也称为WAVE核苷酸片段分析系统。利用高效液相色谱原理，PCR扩增后的DNA片段与缓冲液（TEAA）混合形成液相，流动相被高压驱动，通过一个DNA分离柱DNA Se...

【实验目的】 1．了解PCR-DGGE技术的原理。 2．了解并熟悉PCR-DGGE技术的步骤。 【实验原理】 变性梯度凝胶电泳（DGGE）是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链，称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为...

【实验目的】 1．了解PCR-SSCP技术的原理。 2．了解并熟悉PCR-SSCP技术的步骤。 【实验原理】 PCR-SSCP是1989年日本Orita等创建的筛查突变的新技术。它是一种简单、快速、经济的点突变筛查手段。PCR-SSCP技术的基本原理是PCR扩增后的DNA片段经变性成单链DNA，...

【实验目的】 1．熟悉PCRRFLP分析技术原理及实验步骤。 2．掌握琼脂糖凝胶电泳检测方法。 3．了解PCR RFLP在遗传病基因诊断中的作用。 【实验原理】 聚合酶链式反应（PCR）是模拟体内DNA复制条件在体外酶促合成特异DNA片段的循环反应，可使目的DNA片段得以迅...

ISSR标记 ISSR（inter-simple sequence repeat）标记是一种类似RAPD，但利用包含重复序列并在 3或5锚定的单寡聚核酸引物对基因组进行扩增的标记系统，即用SSR引物来扩增重复序列之间的区域。其原理具体是，ISSR标记根据生物广泛存在 SSR的特点，利用在生物基...

DNA分子水平上的多态性检测技术是进行基因组研究的基...