实验中的一些好习惯 加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均 移液枪用完之后要归到最大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性 一定要记着关水浴箱，切记切记 多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是最快提高的捷径了 所有的试剂都自...
并不是所有的实验都可以做real－time的，技术路线要选好 当你的基因表达量少或有些不表达 具体就是做普通pcr跑胶条带比较弱，不是很亮的情况下 个人觉得最好不要选择real，不容易做好，特别是融解曲线 用sbgr green染料做的话，引物设计时扩增片断最好小于250...
一 引物的设计 引物的设计对于这个实验至关重要，因为real time pcr的检测灵敏度比较高，所以相应的对引物设计的要求就很高。普通的要求规则大家都知道，还有几点必须注意： 1，引物的错配率（引物错配形成引物二聚体，但是SYBR照样能嵌入进去，结果导致实验...
引物的设计相对于普通的PCR来说，还是有一些更为严格的要求： 1、引物的退火温度要高，一般要在60度以上； 2、引物的产物大小不要太大，一般在80-250bp之间都可； 3、引物一般要设计在目的基因中跨内含子的位置，这样可以避免在存在DNA污染的情况下，对目的片...
real time RT-qPCR 是检测样本中特定基因表达量的有效方法，包含逆转录步骤和定量PCR步骤。好的开始是成功的一半，获得高质量的、能正确反应样品中转录情况的RNA，对于其后的定量结果，自然是非常重要的。 Mikael Kubista，教授, RD TATAA Biocenter主任： RN...
实时定量PCR以其精确、快速、方便，越来越多的应用在科研、临床及检验检疫的各个领域。但是定量PCR是对精确性要求很高的实验，实验的条件对实验结果的影响非常大。在此谈谈体系优化的问题，希望对做相关试验研究的朋友有所帮助。 1、基本参数的优化： 1）MgCl...
定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行 PCR起始模板量的定量。 广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型： （1）外参法+终产物分析。所...
问：什么是QPCR？ 答：QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统，也叫实 时定量基因扩增荧光检测系统，简称QPCR。 问：QPCR、DNA检测、PCR之间的关系？ 答：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction...
Q1．CT值出现过晚 1.扩增效率低，反应条件不够优化。设计更好的引物或探针；改用三步法进行反应；适当降低退火温度；增加镁离子浓度等。 2.PCR各种反应成分的降解或加样量的不足。 3.PCR产物太长。一般采用80-150bp的产物长度。 Q2．无CT值（信号）出现 1.反...
下表列出了部分文献报道的TaqMan Probes技术所使用的酶和其它相关参数。 Target P1 P2 Probe Enzyme 退火温度 延伸温度 HCV 19 25 27 AmpliTaq DNA polymerase 60℃ 60℃ HIV 19 22 32 AmpliTaq Gold polymerase(Perkin-Elmer) 60℃ 60℃ Albumin 22 22 26 A...