基因表达的检测有几种方法。经典的方法（仍然重要）是根据在细胞或生物体中 所观察到的生物化学或表型的变化来决定某一特定基因是否表达。随着大分子分离技 术的进步使得特异的基因产物或蛋白分子的识别和分离成为可能。随着重组DNA技术 的运用，现在有可能检...

RT-PCR定义： 是指对组织或细胞的总RNA进行抽提，把RNA反转录为cDNA，然后设计目的基因引物进行PCR，琼脂糖电泳并数码拍照，分析电泳条带灰度值，判断目的基因mRNA转录水平的相对量的变化。 RT-PCR流程简介 一、抽提RNA： 1、防止RNA酶污染 180℃的高温下干烤...

1.SYBR Green I： 一种DNA结合染料，能非特异性地与双链DNA结合，结合后发出荧光，价格便宜，但因无特异性，易受到非特异性扩增和引物二聚体地的影响，是定量结果不可靠。可用融解曲线分析区分特异性和非特异性扩增，引物的设计和反应条件的优化对消除非特异...

一 设计引物应遵循以下原则 1 、引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。 2 、引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。 3 、引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5...

PCR或RT-PCR试剂盒的组成 核酸提取试剂 核酸扩增或逆转录-核酸扩增试剂 产物检测试剂（有些使用全自动分析仪的PCR方法因其核酸扩增和检测同时完成，故无专门的产物检测试剂） 影响PCR试剂盒质量的因素 内在因素: 原材料、核酸提取方法、方法学设计 影响PCR试...

一、耐热DNA聚合酶特点 合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素，如何选择最合适的耐热聚合酶，是进行PCR实验首先要考虑的问题。目前市面上有许多耐热 DNA聚合酶，虽然名称各不相同，但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长...

一、 试剂 (1)引物根据待扩增DNA不同，引物亦不同，引物的设计见 http://ask.bbioo.com/special/experiment/PrimerDesign.htm 。 (2)耐热DNA聚合酶：此酶是从耐热细菌中分离出来的，能耐受高温(93100c)，不同耐热DNA聚合酶的特性详见本章第4节。 PerkinE1merc...

一、样品处理 DNA是染色体的主要组成部分，是PCR的扩增模板。要进行PCR，研究DNA结构与功能或者用于诊断目的，首先必须从生物体内提取DNA。DNA 往往以核蛋白形式存在，其分子量大（人的染色体DNA平均大小为3.0109bp），提取DNA应尽量保持DNA完整性和纯度，即...

7．等位基因特异性扩增 在设计引物时，根据已知突变位点的特征，在引物3端或中间设计一错配碱基，使之仅能与突变型或野生型基因互补，而只扩增相对应的突变型或野生型基因。主要用于点突变导致的遗传病的检测。其优点是只需一步PCR，而无需电泳和标记，摆脱了...

聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)简称PCR技术，是近年来发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术，由于其可使特定DNA片段在数量上呈指数增加至可检测范围，故成为基因诊断的重要方法。在PCR基础上衍生的一些扩增技术已用于基因突变的诊断。目...