在NCBI上搜索到该基因，找到该基因的mRNA，在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的origin中，Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。 打开Primer Premier5，点击File-New-DNA sequence, 出现输入序列窗口，Copy目的序列在输入框内（选择As），此窗口...

随机引物 适用于长的或具有发卡结构的 RNA 。适用于 rRNA 、 mRNA 、 tRNA 等所有 RNA 的反转录反应。主要用于单一模板的 RT-PCR 反应。 Oligo dT 适用于具有 PolyA 尾巴的 RNA 。（原核生物的 RNA 、真核生物的 Oligo dT rRNA 和 tRNA 不具有 PolyA 尾巴。...

【实验原理】 RT-PCR 是以RNA 为模板经逆转录反应（Reverse Transcription，RT）产生cDNA 第一链，再以cDNA 为模板进行PCR 扩增以检测目的基因的表达情况。 【实验仪器】 1. 恒温金属浴 2. PCR 扩增仪 【试剂及配制】 RNA PCR Kit (AMV) Ver 3.0 试剂包括：...

实验材料： 水稻叶片的 RNA 。 实验原理：目前 PCR 技术只能扩增 DNA 模板，对 RNA 模板不能直接扩增。mRNA反转录生成的 cDNA 可作为 PCR 的模板进行扩增，这种在 mRNA 反转录后进行的 PCR 扩增称为 RT-PCR 。 RT-PCR 比 Northern 杂交更灵敏，对 RNA 的质量...

三：操作 １：反转录反应 按下表准备反应液 样品 体积 终浓度 ５反应缓冲液 10l １ dNTP混合液 1l 0.2mM 下游引物 50pmol* 1m 上游引物 50pmol* 1m 25mM MgSO4 2L 1mM AMV反转录酶 1l 0.1/l TflDNA聚合酶 1l 0.1/l RNA模板 xl** 去核酶无菌水 加至５０l ２：...

目前已有多种方法用来研究有关细胞和组织中，基因表达产物方面的内容，这些方法主要有Northern印迹、RNase保护分析法、原位杂交、点印迹、Ｓ１核酸酶分析法及反转录与PCR扩增串联的RT-PCR技术等。在这些方法中RT-PCR技术具敏感度高和应用范围广的特点，该技术...

反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以近年来RT-PCR技术被广泛应用于...

八、PCR产物电泳 先将1-10l左右PCR产物，加已点在纸上的溴酸兰，反复吸打混匀后进行电泳，一般电流为10mA，电源100V，电泳30分钟，紫外灯下观察，满意的结果扫描打...

二、实验器具的处理与准备 1、塑料制品：（包括枪头、EP管、匀浆管等） 先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中，将塑料制品逐个浸泡其中，其中小枪头需要吸管打入DEPC水，过夜，然后高压，再烤干备用，实验前将枪头等放入吸头台，再高压一次（EP管） 2、玻璃制品：...

一、知识背景： 1、基因表达：DNA RNA Protein 单拷贝基因表达存在逐步放大机制，如一个蚕丝心蛋白基因 104个丝心蛋白mRNA（每个mRNA存活4d，可以合成105个丝心蛋白） 共合成109个丝心蛋白 。因此单拷贝基因的mRNA表达水平对于其功能水平的调控是非常重要的。...