线索化模型产生的背景及发展 上面已经提到，两个自然进化的蛋白质如果具有30%的等同序列，则它们是同源的蛋白质，具有基本相同的三维结构。那么，其余的是否就不是同源的呢？实际并非如此。在最新的蛋白质数据库PDB中，有上千对蛋白质具有同源的空间结构，但...
5、构建目标蛋白质的环区：在第2步的序列比对中，可能加入空位，这些区域常常对应于二级结构元素之间的环区，对于环区需要另外建立模型。一般也是采用经验性方法，从已知结构的蛋白质中寻找一个最优的环区，拷贝其结构数据。如果找不到相应的环区，则需要用其...
1)什么是Access RT-PCR？ 2)什么是Access RT-PCR系统？ 3)总RNA能否作为模板，是否一定需要 poly(A)+RNA? 4)使用Access RT-PCR系统需要的RNA的量是多少？ 5)同一般常用方法相比较，Access RT-PCR系统有哪些优点？ 6)使用Access RT-PCR系统需要优化哪些条件？...
1、高质量RNA 成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。RNA的质量决定了你能够转录到cDNA上的序列信息量的最大值。一般不必使用oligo(dT)选择性分离 poly(A)+RNA。不管起始模板是总RNA还是poly(A)+...
在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完...
注： 1、RNA若用于核酸转移应溶解于样本缓冲液中，否则DEPC溶解 2、细胞组织加TRIzol匀浆后，可在-60℃放置至少一个月（甚至可一年以上） 3、RNA在75%乙醇中，2-8℃至少可保存一周，-20℃至少可保存一年 两步法RT-PCR （第一步：逆转录反应） 试剂 浓度 体积...
六、需购置的Rt-PCR材料： （生工. Tel. 2236106.） Taq酶（含MgCl2 Buffer） 200u 70.00 dNTP: 1支 oligo(dT)15: 1 OD 40.00 promega M-MLV: 1支 250.00 promega (Buffer) RNasin: 1支 110 -- -20℃ DEPC 5g 110.00 Trizol 100ml/1瓶 Invitrogen Life techno...
一、实验器具与材料： 1、移液枪：1ml、200l、20l、10l、2l 2、吸头：1ml、200l、20l 3、匀浆管：5ml 4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20l吸头的一个 5、EP 管：1.5ml、0.2ml、100l 6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖） 1个125ml的白色试剂瓶（...
1 原理 RTPCR是一种将cDNA合成与PCR技术结合分析基因表达的快速灵敏的方法，主要用于对表达信息进行检测或定量分析,还可以用来检测基因表达差异而不必构建cDNA文库克隆cDNA。 RT-PCR的模板可以为总RNA或poly(A)+选择性RNA。逆转录反应可以使用逆转录酶，以随...
mRNA差别显示技术也称为差示反转录 PCR（Differential Display of reverse Transcriptional PCR）简称为ddRT-PCR。它是将 mRNA反转录技术与PCR技术二者相互结合发展起来的一种RNA指纹图谱技术。 目前已广泛应用于分离鉴定组织特异性表达的基因。差别基因表达...