作者：中华医学网发布时间：2017-10-16 09:44浏览：
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阳离子两性离子阴离子
pH < pIpH = pIpH > pI
电场中：移向阴极不移动移向阳极调节溶液的pH使蛋白质分子的酸性解离与碱性解离相等，即所带正负电荷相等，净电荷为零，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点。在等电点时，蛋白质溶解度最小，溶液的混浊度最大，配制不同pH的缓冲液，观察蛋白质在这些缓冲液中的溶解情况即可确定蛋白质的等电点。
试剂和器材
一、试剂
1mol/L乙酸：吸取99.5%乙酸（比重1.05）2.875mL，加水至50mL。
0.1mol/L乙酸：吸取1mol/L乙酸5mL，加水至50mL。
0.01mol/L乙酸：吸取0.1mol/L乙酸5mL，加水至50mL。
0.2mol/L NaOH：称取NaOH2.000g，加水至50mL，配成1mol/L NaOH。然后量取1mol/L NaOH 10mL，加水至50mL, 配成0.2mol/L NaOH。
0.2mol/L HCl：吸取37.2%（比重1.19）HCl 4.17mL，加水至50mL，配成1mol/L HCl。然后吸取1mol/L HCl 10mL，加水至50mL，配成0.2mol/L HCl。
0.01%溴甲酚绿指示剂：称取溴甲酚绿0.005g，加0.29mL 1mol/L NaOH，然后加水至50mL。
二、测试样品
0.5%酪蛋白溶液：称取酪蛋白（干酪素）0.25g放入50mL容量瓶中，加入约20mL水，再准确加入 1mol/L NaOH 5mL，当酪蛋白溶解后，准确加入1mol/L乙酸5mL，最后加水稀释定容至50mL，充分摇匀。
三、器材
试管1.5×15cm（×8）；移液管1mL（×4），2mL（×4），10mL（×2）；胶头滴管（×2）。
操作方法
一、蛋白质的两性反应
（1）取一支试管，加0.5%酪蛋白1mL，再加溴甲酚绿指示剂4滴，摇匀。此时溶液呈蓝色，无沉淀生成。
（2）用胶头滴管慢慢加入0.2mol/L HCl，边加边摇知道有大量的沉淀生成。此时溶液的pH值接近酪蛋白的等电点。观察溶液颜色的变化。
（3）继续滴加0.2mol/L HCl，沉淀会逐渐减少以至消失。观察此时溶液颜色的变化。
（4）滴加0.2mol/L NaOH 进行中和，沉淀又出现。继续滴加0.2mol/L NaOH，沉淀又逐渐消失。观察溶液颜色的变化。
二、酪蛋白等电点的测定
（1）取同样规格的试管7支，按下表精确地加入下列试剂：
|
试剂（mL） |
管号 |
||||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
|
|
1.0mol/L 乙酸 |
1.6 |
0.8 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
|
0.1mol/L 乙酸 |
0 |
0 |
4 |
1 |
0 |
0 |
0 |
|
0.01mol/L 乙酸 |
0 |
0 |
0 |
0 |
2.5 |
1.25 |
0.62 |
|
H2O |
2.4 |
3.2 |
0 |
3 |
1.5 |
2.75 |
3.38 |
|
溶液的pH |
3.5 |
3.8 |
4.1 |
4.7 |
5.3 |
5.6 |
5.9 |
|
混浊度 |
|||||||
（2）充分摇匀，然后向以上各试管依次加入0.5%酪蛋白1mL，边加边摇，摇匀后静置5min，观察各管的混浊度。
（3）用-、+、++、+++等符号表示各管的混浊度。根据混浊度判断酪蛋白的等电点。最混浊的一管的pH值即为酪蛋白的等电点。
注意事项
在测定等电点的实验中，要求各种试剂的浓度和加入量相当准确。