（一）第一向等电聚焦 1. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室温溶解。 2. 在小管中加入0.01g DTT， Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混匀。 3. 从小管中取出400ml水化上样缓冲液，加入100ml样品，...

2）染色剂：核酸电泳后，需经染色后才能显现出带型，最常用的是溴化乙锭染色法，其次是银染色。 溴化乙锭(ethidium bromide，EB)是一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下，发出红色荧光。根据情况可在凝胶电泳液中加入终浓度为 0.5...

凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种。 一、琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法。琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物。根据琼脂糖的溶解温度，把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖。低熔点...

一、 试剂与材料： 1、 琼脂糖 2、 电泳缓冲液（1TAE） 3、 10mg/ml溴化乙锭 4、 上样缓冲液 5、 电泳仪和水平电泳漕 6、 透射紫外灯 7、 胶带纸 二、 操作方法 按1～2%的琼脂糖浓度（据DNA样品分子量不同而定）配胶100ml 置于微波炉内加热搅拌，至琼脂糖完全...

（一）DNA的凝胶电泳：凝胶电泳是分子克隆的中心技术之一。 1.琼脂糖凝胶用于分离大于200～1000bp的片段;操作简单、快速，且分离范围广，分辨率高。 2.聚丙烯酰胺凝胶用于分离5－500bp的片段; 效果好、分辨率极高，相差1bp的DNA片断就能分开，能容纳相对大量...

不同的带电颗粒在同一电场中泳动的速度不同。常用泳动度（或迁移率）来表示。泳动度是指带电颗粒在单位电场强度下泳的速度。 影响泳动度的主要因素有： 1、首先决定于带颗粒的性质，即颗粒所带净电荷的数量，大小及形状 一般说来，颗粒带净电荷多，直径小而接...

电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。例如蛋白质具有两性电离性质。当蛋白质溶液的pH在蛋白质等电点的碱侧时，该蛋白质带负电荷，在电场中向正极移动，相反则带正电荷，在电场中向负极移动，只有蛋白质溶液pH在蛋白质的等电点时静电荷...

探针冷竞争反应： Nuclease-Free Water 4微升 EMSA/Gel-Shift结合缓冲液（5X） 2微升 细胞核蛋白或纯化的转录因子 2微升 未标记的探针 1微升 标记好的探针 1微升 总体积 10微升 突变探针的冷竞争反应： Nuclease-Free Water 4微升 EMSA/Gel-Shift结合缓冲液（...

1.探针的标记： （1） 如下设置探针标记的反应体系： 待标记探针 （1.75pmol/微升） 2微升 T4 Polynucleotide Kinase Buffer （10X） 1微升 Nuclease-Free Water 5微升 [-32P]ATP（3,000Ci/mmol at 10mCi/ml） 1微升 T4 Polynucleotide Kinase （5-10U/微升）...

TFIIB与预启动复合物结合后，致使RNA聚合酶II和TFIIF结合到转录启始区。故TFIIB在预启动复合物的形成中有重要作用。当用纯化的 TFIID作凝胶迁移实验时，poly dI-dC不用加入结合反应中。结合缓冲液含10%甘油，20mM Tris（pH8.0）， 10mM MgCl2, 2mM DTT, 89mM...