血清脂蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE;polyacrylamide gel electr

一 原理：
　　聚丙烯酰胺凝胶电泳，具有分子筛和电泳的双重作用，它的分辨力高，以此为电泳载体，可以将血清脂蛋白各组分分离。
　　血清中脂类物质均与血清载脂蛋白结合成水溶性的蛋白形式存在。各种脂蛋白中所含载脂蛋白的种类和数量不同，各种脂蛋白颗粒大小也相差较大，因此，用聚丙烯酰胺电泳，血清中的脂蛋白，可根据其所带电荷的性质和多少，以及分子量的大小得到分离。
　　在本法中用乙酰苏丹黑(脂类染料)和脂蛋白结合，染成黑兰色，因此在电泳后不必染色，即可清楚地直接观察电泳图谱，进行组分分析，也可进一步采用分光光度法进行定量测定。血清蛋白经电泳后可分成五条带，从阳极到阴极依次为α—脂蛋白，β—脂蛋白，前β—脂蛋白，乳糜微粒、染料(在点样端)。

二 试剂：
l、20％丙烯酰胺溶液：取丙烯酰胺19.6克，双丙烯酰胺0.4克，加蒸馏水溶解稀释到100毫升，贮于棕色瓶中冰箱保存。
2、凝胶缓冲液：(0.5M)取三羟甲基胺基甲烷(Tris)6.057克，加入1M HCl 10毫升，最后稀释到100毫升。
3、50％TEMED(四甲基乙二胺)
4、10％过硫酸铵溶液：取过硫酸铵0.5克，溶于5毫升蒸馏水中，(每周配制)。
5、人血清
6、乙酰苏丹黑：取2克苏丹黑，加60毫升吡啶，40毫升醋酸酐，混合放置过夜，再加3升蒸馏水，乙酰苏丹黑即析出，抽滤后，再溶于丙酮中，将丙酮蒸发，剩下者即为乙酰苏丹黑，将乙酰苏丹黑溶于乙醇中制成饱和溶液。
7、25％蔗糖溶液
8、电泳缓冲液：(pH8.6)，称取Tris0.6克，甘氨酸2.28克，加蒸馏水溶解并稀释至1000毫升，即为Tris—甘氨酸缓冲液。

三 仪器：
夹芯式垂直电泳槽、电泳仪、恒温水浴、微量进样器(50—100ml)、烧杯(50ml)、滴管。

四 操作步骤：

1、凝胶制备：
　　脂蛋白电泳一般采用分离胶和浓缩胶组成的凝胶板;下层为分离胶，约含4% 丙烯酰胺；上层为样品胶，约含2.5％丙烯酰胺，制备方法按下述进行。
(1)分离胶制备：
20％丙烯酰胺溶液 2.4ml
凝胶缓冲液 1.2ml
蒸馏水 7ml
50％TEMED溶液 0.05ml
置小烧杯中，混匀，再加入10%过硫酸铵溶液0.15毫升，混匀，迅速用滴管分装在二块玻璃板之间，（玻片周围的空隙先用硅橡胶条封住，放入电泳装置中夹紧），凝胶加至红色背景底线处），然后用注射器沿玻板壁小心地在胶面上滴加蒸馏水(约0.5cm)，使凝胶形成时有一水平面，在室温中放置30分钟即可聚合完全。
(2)浓缩胶制备：
20％丙烯酰胺溶液 1.8ml
凝胶缓冲液 1.2ml
蒸馏水 7.0ml
50％TEMED溶液 0.05ml
置小烧杯中，混匀，再加10％过硫酸铵溶液0.15ml，混匀。将分离胶上层的水倒去，加入配制好的浓缩胶溶液，至红色背景上线处，插入加样梳，放45分钟聚合后即可使用，使用前小心拔去加样梳。

2、加样
　　取人血清0.18ml，加乙酰苏丹黑0.02ml，置37℃水浴保温30分钟，再加入25％蔗糖溶液0.2ml，然后用微量进样器取此混合液适量加于凝胶的每个凹槽中。

3、电泳
　　在电泳装置的左、右槽中分别注入Tris—甘氨酸缓冲液，样品端接负极(短玻璃的一边)，电流控制在40—50mA，一般电泳约半小时，电泳时留心样品的分离情况。
　　电泳结束将电泳图谱画在实验报告上，并指出各条带的名称。