肿瘤类器官构建通用规范专家共识（2026 年版）

发布：2026，《中国癌症杂志》2026,36 (3):299‑312；国际实践指南注册号：PREPARE‑2026CN150中国癌症杂...。 发起：多家国内学会联合制定；包含19 条核心推荐意见；覆盖伦理‑样本‑原代培养‑传代‑冻存复苏‑三级质控‑实验室‑数据‑生物安全全链条。 ⚠️本共识为人源肿瘤类器官构建通用技术规范，仅为科研 / 转化研究技术标准，不等于临床诊断 / 体外药敏试剂盒；不能直接替代临床诊疗中国癌症杂...。

一、总则与伦理、遗传资源要求

1. 伦理与知情同意（硬性前置）
   • 人源肿瘤组织样本采集前，必须通过伦理委员会审查，受试者签署书面知情同意书，明确用途、商业转化、样本存储、数据使用、隐私保护；符合《人类遗传资源管理条例》要求中国癌症杂...。
   • 样本、个人信息必须脱敏匿名化处理，保护受试者隐私；严禁泄露可识别个人身份信息中国癌症杂...。
2. 适用范围
   • 适用：人实体肿瘤来源肿瘤类器官（手术标本、穿刺活检、内镜活检、胸腹水恶性细胞）；覆盖从样本接收、解离、原代建立、传代扩增、冻存复苏、质量控制、入库保藏全流程中国癌症杂...。
   • 不覆盖 iPSC 来源肿瘤模型；不专门覆盖类器官药敏临床报告解读（另有专项共识）中国癌症杂...。
3. 证据等级：采用循证分级：A/B 级证据；1 级（强推荐）、2 级（弱推荐）共 19 条核心推荐意见中国癌症杂...。

二、样本采集、转运与前处理

1. 样本来源类型

• 手术切除标本、穿刺活检、内镜活检标本、恶性胸腹水样本。
• 尽量避开坏死、出血、大量坏死液化区域；优先选取活性肿瘤组织区域中国癌症杂...。
• 离体后尽快处理；离体到组织解离处理尽量控制在较短时间窗口；使用专用组织保护转运液，4℃转运，禁止常温长时间放置。

2. 样本接收与登记

• 每例赋予唯一样本编号；完整记录：脱敏受试者信息、临床诊断、肿瘤类型、标本类型、取材时间、离体‑处理间隔、既往放化疗史、病理结果；同步留存配对正常对照组织（条件允许）中国癌症杂...。
• 接收时初筛：肉眼观察组织颜色、坏死占比、有无化脓污染；腹水样本记录细胞量、血性 / 浑浊情况。

3. 组织解离与原代接种

1. 组织处理：机械剪碎 + 酶组合消化（胶原酶、DNase 等）；根据癌种、间质多少调整酶组合、消化时间；减少细胞过度损伤。
2. 去除红细胞、死细胞、碎片；过滤去除大块组织残渣；活细胞计数后接种。
3. 基质胶 / 基质替代物三维培养体系；设置阴性 / 对照；同步做空白无菌对照监测污染。

腹水样本：离心富集肿瘤细胞，去除红细胞后直接铺板构建类器官。

三、原代培养、传代、换液

1. 培养基：依据不同癌种选择对应的肿瘤类器官专用培养基；记录培养基配方、批次、批号；做好试剂溯源。
2. 换液：按 SOP 定期半量 / 全量换液，记录换液时间。
3. 传代判定标准：类器官大小、密度达到合适密度即可传代；
   • 酶消化 / 机械吹打进行解离，避免过度消化损伤活细胞；
   • 记录传代代次（P0、P1、P2……）；P0 为原代初建；P1 为第一次传代，以此类推。
4. 重点提示：
   • 警惕正常上皮类器官过度生长，这是建系失败最常见原因之一，需要结合病理、标志物区分肿瘤 vs 正常类器官。
   • 早期代次（P0‑P10）更适合用于药物、机制研究；＞P20 晚期代次容易出现遗传漂变，用于关键实验必须重新做遗传保真验证中国癌症杂...。

四、冻存与复苏（共识关键技术要点）

1. 冻存：选择生长状态良好、无污染的类器官；使用适配类器官的冻存保护液；程序降温；‑80℃临时，长期保存入液氮气相。
2. 复苏：37℃快速复溶，去除冻存保护剂，接种回三维培养体系。
3. 共识参考指标（B 级证据，1 级推荐）中国癌症杂...：
   • 复苏后即刻细胞活力≥70%；长期冻存样本复苏活力可下降，但需要1‑2 周内可重新恢复类器官生长；
   • 建议每批次冻存样本抽样复苏，评估冻存效果；做好冻存管位置、批次、代次完整记录。

五、三级质量控制体系（本共识核心）

实行一级（日常常规质控）、二级（表型保真）、三级（遗传身份质控）三级质控，贯穿全生命周期中国癌症杂...。

一级质控：日常基础质控（必须做）

1. 形态学：固定时间、固定倍率拍照；记录类器官大小、直径、结构（实心 / 囊状 / 出芽 / 坏死碎片）；建立生长曲线评估增殖动力学。
2. 微生物检测：细菌、真菌、支原体必须定期检测；支原体不能仅靠肉眼镜检，需要 PCR / 染色法检测；污染样本直接废弃。
3. 完整实验记录、SOP 执行记录；信息化台账。

二级质控：表型保真度（模型生物学匹配）

1. HE 染色：类器官石蜡切片 HE，与来源原始肿瘤病理切片对比，观察肿瘤细胞异型、组织结构。
2. 免疫组化 IHC：检测该癌种关键诊断 / 靶点标志物；类器官蛋白表达模式应与原肿瘤组织保持高度一致中国癌症杂...。

三级质控：身份与遗传保真（遗传层面）

1. STR 短串联重复序列鉴定（必做）：
   • 类器官 STR 图谱与来源组织 / 患者对照匹配度≥80%，排除交叉污染、错配样本（参照 ANSI/ATCC 标准）中国癌症杂...。
2. 基因组层面：
   • 比对类器官与原发肿瘤：关键驱动基因突变、SNV、CNV 拷贝数变异一致性；
   • P0‑P10 早期代次：异质性保留好，适合实验；＞P20 晚期代次，强烈建议重测基因组，排除遗传漂变。
3. 功能验证（用于药敏等功能实验时）：
   • 设置阳性、阴性对照；药敏实验：可接受参考：Z’因子≥0.5，阴性对照孔 CV≤15%作为参考阈值中国癌症杂...。

可入库 / 共享最低放行标准（共识总结）

1. 无细菌、真菌、支原体污染；
2. 形态稳定，完整可追溯操作记录；
3. HE+IHC 证明与原肿瘤组织病理表型一致；
4. STR 身份鉴定合格（匹配≥80%），排除交叉污染；
5. 关键驱动突变与亲本肿瘤保持一致；晚期代次需重新验证基因组；
6. 用于功能实验还需要功能学验证合格中国癌症杂...。

常见实体瘤建系成功率参考（共识附表）中国癌症杂...

表格

定义成功建系：可稳定传代≥3 代，且至少满足 STR 匹配 / 病理形态一致 / 关键驱动突变一致其中一项中国癌症杂...。

六、实验室硬件、人员、生物安全、信息化

1. 人员：上岗培训、考核；无菌操作、细胞培养、病理基础培训；定期能力比对；全部记录存档。
2. 实验室分区：样本接收区、组织解离处理区、细胞培养区、储存区；
   • 超净台（解离接种）：ISO 5 级；培养室整体环境 ISO 7 级；单向气流，防止交叉污染中国癌症杂...。
3. 生物安全与废物处置
   • 人源肿瘤类器官属于人类生物样本，按医疗废物管理；废弃物分类、包装、交接、处置全流程留痕，有泄漏应急预案中国癌症杂...。
4. 信息化管理系统 OIMS
   • 建议搭建专门类器官信息管理系统；实现：样本溯源、冻存库存、培养记录、质控结果、质控图片、组学数据统一管理；
   • 理想状态支持双向溯源：患者临床信息 ↔ 类器官全生命周期数据；对接病历系统（脱敏），服务后续转化研究中国癌症杂...。

七、19 条核心推荐意见要点摘要

1. 开展人源肿瘤类器官构建，项目必须经伦理委员会批准，受试者签署书面知情同意，落实人类遗传资源相关法规，做好隐私脱敏保护（A 级证据，1 级推荐）。
2. 标本离体后尽快处理，使用合适保护转运介质，控制离体至处理时间窗口，4℃条件转运，避免常温放置（B 级证据，1 级推荐）。
3. 样本接收建立唯一编号，完整记录临床、病理、取材、处理时间等关键信息，留存配对对照组织（条件允许）（B 级证据，1 级推荐）。
4. 组织解离根据肿瘤间质丰富度，优化酶消化‑机械处理组合，尽可能保留肿瘤细胞活性，降低死细胞比例（B 级证据，1 级推荐）。
5. 设置空白 / 阴性对照，监测微生物污染；严格执行无菌操作流程（B 级证据，1 级推荐）。
6. 培养基组分、批次完整记录溯源；根据癌种选择适配培养体系（B 级证据，1 级推荐）。
7. 严格记录每一株类器官传代代次 P0/P1……，区分原代、早期、晚期代次（B 级证据，1 级推荐）。
8. 警惕正常上皮过度增殖，必要时借助病理、标志物区分肿瘤 / 正常类器官（B 级证据，1 级推荐）。
9. 冻存选择生长状态优良无污染的培养物，使用适配冻存液，程序降温，长期液氮气相保存（B 级证据，1 级推荐）。
10. 复苏后评估细胞活力；批次抽样复苏，评估冻存保存效果（B 级证据，1 级推荐）。
11. 建立一级质控（日常形态、微生物污染筛查），支原体不能只靠镜检，采用专用检测方法（B 级证据，1 级推荐）。
12. 绘制生长曲线，评估增殖动力学，识别生长异常衰退批次（B 级证据，2 级推荐）。
13. 关键节点做病理 + IHC，类器官与原始肿瘤组织做形态、标志物比对（B 级证据，1 级推荐）。
14. 执行三级质控体系：一级日常监测；二级表型病理‑IHC 验证；三级 STR + 基因组遗传保真验证；STR 匹配≥80%；晚期代次重测基因组（B 级证据，1 级推荐）。
15. 用于药敏功能实验时，设置对照，报告实验质量指标（Z’因子、变异系数），保证功能结果可靠（B 级证据，2 级推荐）。
16. 建立异常处置预案：污染、活力不足、遗传漂移样本分级处置；回溯问题，持续优化体系（B 级证据，1 级推荐）。
17. 样本‑数据访问授权审批机制；对外共享签署正式协议，明确知识产权、用途限制（A 级证据，1 级推荐）。
18. 医疗废物全流程管理、交接留痕、泄漏应急预案（A 级证据，1 级推荐）。
19. 建设类器官信息管理系统，实现全生命周期数字化可追溯（A 级证据，2 级推荐）中国癌症杂...。

八、重要边界提示（共识明确）

1. 本共识是构建模型的技术规范，≠临床体外诊断规范；肿瘤类器官药敏结果仅作为科研 / 转化参考，不能单独作为临床用药决策唯一依据。
2. 类器官存在体外培养选择压力，存在遗传 / 表型漂移风险，优先使用早期代次（P0‑P10）做功能实验。
3. 各实验室可在本通用最低标准基础上，结合不同癌种特点，制定癌种‑特异性 SOP。