一、形态学检测 （一）光学显微镜和倒置显微镜 1、未染色细胞 凋亡细胞的体积变...

2、RT-PCR法检测细胞bcl-2 mRNA的表达： （1）总RNA提取： 为了获得高质量的真核细胞mRNA，必须使用RNA酶抑制剂。操作过程中应避免RNA酶污染器材和试剂，因此所有剥离、塑料器材先用0.1%DEPC水溶液浸泡12h，然后用无菌的新鲜蒸馏水淋洗数次，塑料器材应采用高...

（二）荧光法： 选用上述最佳浓度作用于肿瘤细胞，培养细胞48h后，收货细胞用PBS洗2-3次后用0.4%多聚甲醛室温下固定30min。 弃去固定液，并用PBS洗2次后，用1%Triton X-100作用4min加入适量的0.5mg/L DAPI荧光染色60min，用PBS冲洗3次，取10ul滴片，干燥后于...

细胞凋亡又称程序性细胞死亡（PCD）,是细胞衰老自然死亡的主要方式之一，在机体中承担着重要的调控作用。它不仅在维持细胞群体数量的稳定、胚胎发育和免疫系统的克隆选择方面，而且在肿瘤发生、发展、抗肿瘤药物的治疗等方面具有十分重要的作用。 细胞凋亡是...

（二）荧光标记法 1．材料与试剂 采用德国Boehringer- Mannheim公司In Situ Cell Death Detection 试剂盒，或美国Oncor公司ApopTagTM试剂盒，包括： ⑴ 生物素标记的-Dutp(Biotin-dUTP)或地高辛标记的-dUTP(Digoxingeningll-dUTP)１nmol/l ⑵ TdT 酶（25U/l）...

一、概述 细胞凋亡（apoptosis,Apo）是细胞增殖的反面，探讨的是细胞死亡的方式与机制。凋亡一词来源于希腊语。原指花瓣、叶片的脱落。自1972年Kerr首次提出细胞凋亡的概念以来，随着细胞生物学、免疫学和肿瘤学的研究发展，最近几年人们对细胞凋亡的重大理论...

五、无机离子和微量元素： 钠、钾、镁、钙、磷、氮等无机离子是细胞生长所必需的，它们参与细胞的代谢，是细胞组成所需要的。此外，微量元素铁、锌、硒等也是细胞生长需要的。细胞培养时用的平衡盐溶液主要含钠、钾、钙、镁等阳离子，其比例与海水或哺乳动物...

离体细胞与体内的细胞在营养代谢上是有区别的。机体内的细胞营养可受神经和激素等进行一系列的统一调节，而离体的细胞则不受其调节。离体培养细胞与体内细胞在营养要求上的主要差别如下：体外长期培养的细胞大多需要血浆、血清或胚胎浸出液，而这类培养基都可...

CMC中效应细胞的制备： 1）用淋巴细胞分离液分离PBMC： 1、抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸盐（PBS）悬浮细胞。将此悬液小心加在淋巴细胞分离液上，400g离心30分钟。 2、离心后红细胞在管底，PBMC在血浆和淋巴细胞分离液的交界面。收集PBMC，...

JAM检测技术是用于测定细胞死亡或凋亡的方法，如51Cr稀放法事基于细胞死亡往往伴随有细胞膜破裂及细胞质的释放，用51Cr或125I标记相关的靶细胞，与效应细胞共培养一定时间后，测定一定体积的培养上清中的放射性计数，以反映细胞损伤情况。而人们发现，细胞死...