3、等密度离心法 等密度离心法(isodensity centrifugation)根据Stokes公式,当颗粒密度(p)等于介质密度(M)时,离心时颗粒悬浮于介质中不移动。等密度离心法就是根据这一原理进行的。采用包括各种颗粒密度范围的梯度介质,把要分离的样品放在密度梯度液...
就像可以把细胞从组织中分离出来进行研究一样,人们也可以把细胞器从细胞中分离纯化出来,以研究它们各自特有的的化学组成、酶活性和代谢特点。尽管在一个世纪前就有人试图分离细胞器,但直到20世纪40年代有了超速离心机和细胞匀浆技术后,才真正建立了细胞器...
[器材和试剂] ● 30m1Corex管,酸洗并硅化 ● 预冷离心机和吊桶式转头 ● Ficoll(Amersham Biosciences) ● 冰冷磷酸盐缓冲液(PBS),pH 7.4 ● 裂解缓冲液:5mol/L单巯基氰酸胍,10mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA),50mmol/L TrisHCl, 1mmol/L二硫苏糖醇(DTT),用...
4.rDNA片段的制备 (1)对所得重组质粒DNA进行SacⅠ酶切,反应体系如下:SacⅠ 4l(约20单位),质粒DNA 50l(20g),10缓冲液(0.5mol/L Tris-HCl,pH7.5,50mmol/L MgCl2)10l,灭菌重蒸水36l。 (2)将反应后的混合物进行琼脂糖凝胶电泳2-3h,在紫外灯下确定DNA片段...
一.基本原理 核酸分子杂交技术是目前分子生生物学、细胞生物学和生物化学研究中应用最广泛的技术之一,是定性、定量和定位检测两条来源不同的聚核苷酸链上碱基顺序同源性的一种手段。DNA分子是高度有序的双键分子。一条链的碱基与另一条链的碱基以氢键配对相...
实验原理 巨噬细胞(M)发育:骨髓多能干细胞定向干细胞(髓样干细胞)单核母细胞前体单核细胞单核细胞血液组织(分化为巨噬细胞) M分布:单核细胞主要于血液中,巨噬细胞几乎存在于所有表皮和黏膜下组织。 M形态:有伪足,马蹄状单核,细胞形体大。 M分离纯...
(一)显示线粒体Regand染色法 1.取材固定:固定材料必须新鲜,所以要求杀死动物后立即取材,切成12mm3大小的块,投入固定液中。 固定液: 3%重铬酸钾20ml 福尔马林(中性)5ml 固定4天(可在冰箱中),每天换固定液一次。4天后转入3%重铬酸钾中7天,每2天换...
线粒体是细胞中重要的细胞器,存在于绝大多数生活细胞中,它的主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。正由于这样,对线粒体膜,呼吸链酶及线粒体DNA等成分的结构,功能以及物理化学性质的研究已经成为细胞生物学研究中的重要课题,所以提取线粒体的...
细胞培养 1. 将羊水(约20ml)转移到无菌的离心管中,1000rpm离心10分钟; 2. 去除上清液,用于其它分析,保留细胞悬液约0.5~1ml,用培养基混匀到2~2.5ml左右; 3. 将细胞悬液平分到3只Chromslide培养皿中; 4. 培养24/48小时后,向每只Chromslide培养皿中加...
一、原理 人的羊水细胞能长成单层并可连续进行传代培养,但它们的一些特征与一般成纤维细胞不同。在羊水中存在着各种不同类型的胎儿细胞,依据其外形和生长特征可区分为以下三类:上皮细胞(E)、成纤维细胞(F)和羊水细胞(AF)。E细胞在胰酶消化的连续培养...