1. 溶液准备 2样品缓冲液：130mM Tris-HCl （ pH8.0 ） , 20% （ v/v ） 甘油 , 4.6% （ w/v ） SDS , 0.02% 溴酚蓝 , 2%DTT PBS （ pH7.4 ） :10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4 ，50mM NaCl，2.7mM KCl RIPA缓冲液：50mM Tris-HCl（pH7.4），150mM NaCl，1mM EDTA...

裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。这两种方法（包括SDS 和溶菌酶处理等）提取纯化DNA中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低...

SDS，NP-40，TritonX-100这三种去垢剂的作用是不同的，或者说作用力量强弱不同。 SDS属于离子型去垢剂，最厉害，基本可以把细胞完全破掉，DNA会释放出来，裂解液变得很粘稠。 NP-40是很温和的去垢剂，1%浓度的基本可以破坏掉胞膜，而对核膜破坏的作用弱，结合...

1、方法一 试剂： （1）变性液组成：25 g异硫氰酸胍溶于33 ml CSB中（42 mmol/L pH4.0乙酸钠、0.83%十二烷基肌氨酸钠、0.2 mmol/L -巯基乙醇），65 ℃溶解，过滤灭菌，4 ℃预冷。 （2）酸性酚配制：55 ℃时，500 g酚溶入500 ml 50 mmol/L，pH4.0乙酸钠，混匀...

线粒体和细胞核的制备与观察 利用细胞核与线粒体在一定介质中的沉降速度的差异，可采取分级差速离心的方法，将细胞核与线粒体逐级分离出来。（差速离心技术） 线粒体是真核细胞特有的进行能量转换的重要细胞器。将动植物组织制成匀浆，在适当的悬浮介质中差速...

一、破碎细胞的方法 1.杆状玻璃匀浆器法 该匀浆器由一根端部表面磨砂的玻璃杆和一个内壁磨砂的玻璃套管组成。使用时，先用锋利的刀片把组织块切碎，然后把碎块加入套管中，用力使玻杆移动使组织细胞破碎。 2.高速组织捣碎机法 使用时将4℃预冷的组织碎块或细...

第三节 微粒体的分离 细胞通过匀浆破碎时，细胞质膜碎成片段，这些膜片段的末端融合形成的直径小于100nm的小泡。来自不同细胞器（细胞核、线粒体、质膜、内质网等）的小泡有不同的特性，所以可以将这些小泡相互分离。由内膜系统衍生而来的小膜泡形成相似大小...

细胞由各种亚细胞结构组成。其重要的研究手段之一是分离纯化亚细胞组分，观察它们的结构或进行生化分析。离心技术是实现这一目标的基本手段。一般认为，转速为10～25Kr/min的离心机称为高速离心机；转速超过25Kr/min，离心力大于89Kg者称为超速离心机。目前超...

分离亚细胞组分的第一步是制备组织匀浆或细胞匀浆。匀浆（Homogenization）是在低温条件下，将组织或细胞放在匀浆器中加入等渗匀浆介质（即0.25moL/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙溶液）研磨，使细胞被机械地研碎成为各种亚细胞组分和包含物的混合物。 分离亚细胞组...

一、所需试剂及设备 小白鼠、冰块、玻璃匀浆器、普通离心机、台式高速离心机、普通天平、光学显微镜、载玻片、盖玻片、刻度离心管、高速离心管、滴管、10ml量筒、25m1烧杯、玻璃漏斗、解剖剪、镊子、吸水纸、纱布、蜡盘、平皿、牙签。0.25moL/L蔗糖一0.003mol...