1、细胞以1.5105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0 期。 2、终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30g/L），37℃，孵育40min。 3、弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。 4、甲醇/醋酸...
1、如果靶细胞是帖壁细胞，在细胞因子作用适当时间后，用生理盐水洗去死亡细胞，用0.25％胰蛋白酶液消化细胞。加适量生理盐水吹打，使细胞分散成单个细胞。直接在血细胞计数板上计数细胞。 2、如果靶细胞是悬浮细胞，则需要用染色剂区分死细胞和活细胞然后再...
1、取96孔细胞培养板，每孔中加0.1ml含2104 ～10104 靶细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），在37℃ 5％CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养2～3小时让细胞帖壁（如果是悬浮细胞可直接进行下一步） 2、用RPMI-1640培养液2～10倍递次稀释细胞因子...
1、培养IL-2依赖细胞株CTLL-2细胞或HT-2细胞（检测IL-2），或者IL-3依赖细胞株FDC-P1细胞或FL5.12细胞（检测 IL-3）到对数生长期。 2、取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml含1104 ～2104 上述细胞之一的DMEM培养液（加10％小牛血清）。 3、每孔加0.1ml系列稀释的待...
1、按MTT检测法培养细胞和用不同稀释度的细胞因子处理细胞。 2、吸去培养液，用PBS洗涤两次（如为悬浮细胞，应在吸去上清液前先离心）。 3、每孔加60l NAG染液，在37℃ 5％ CO2 的饱和水汽CO2 培养箱中培养4小时。 4、每孔加90l终止液，混匀后置酶联检测仪上...
AlamarBlueTM 摄入法 1、按MTT检测法培养细胞和用不同稀释度的细胞因子处理细胞。 2、在培养结束前24小时加入Alamar Blue染料，96孔细胞培养板每孔20l。 3、在培养结束后，直接在酶联检测仪上测定光吸收值。氧化型Alamar Blue的最大光吸收在570nm，用OD570...
1、按MTT法用细胞因子处理靶细胞适当时间，用PBS洗去死亡细胞，洗两次。 2、向96孔细胞培养板各孔中加0.2ml新鲜配制的底物液（0.2mol/L 硼酸，1mmol/L MgCl2 ，1.2mmol/L甲伞基磷酸）。在37℃ 5％ CO2 的饱和水汽CO2 培养箱中培养3小时。 3、在荧光计数仪上测...
1、ATP反应液（Bio-Orbit）是粉末状混合物，含有荧光素、荧光素酶、0.5mmol醋酸镁、50mg BSA和0.1mol无机焦磷酸。在4℃可以保存1个月。用前用10ml含2mmol/L EDTA的0.1mol/L pH7.75 Tris-醋酸缓冲液稀释。稀释液分装后可在－20℃长期保存。 2、在已经完成促增...
一、结晶紫检测法 1、在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5104 ～104 WEHI-164细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），37℃ 5％ CO2 的二氧化碳培养箱中培养2～3小时，让细胞帖壁。 2、用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品，根据需要3～5倍递次稀...
Important notes： Morphological data so far are most reliable and convincing evidence for apoptosis， especially with electromicroscopy Morphological analysis should be included together with other parameters Different methods may suit dif...