一、普通光学显微镜观察方法 （一）苏木素－伊红染色（HE 染色法） 石蜡组织切片的HE染色 1、取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，4m切片。 2、切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min二甲苯（Ⅱ）5min100％乙醇2min95％的乙醇1min80％乙...

1、96孔细胞培养板中培养细胞，去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次（如为悬浮细胞则用离心洗涤）。 2、去洗涤液后加入磷酸酶底物100l/孔。 3、37℃，孵育1～4h。 4、加入0.1mol/L氢氧化钠10l/孔。 5、在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度，将细胞培养板其中不含细...

1、细胞以1.5105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0 期。 2、终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30g/L），37℃，孵育40min。 3、弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。 4、甲醇/醋酸...

1、如果靶细胞是帖壁细胞，在细胞因子作用适当时间后，用生理盐水洗去死亡细胞，用0.25％胰蛋白酶液消化细胞。加适量生理盐水吹打，使细胞分散成单个细胞。直接在血细胞计数板上计数细胞。 2、如果靶细胞是悬浮细胞，则需要用染色剂区分死细胞和活细胞然后再...

1、取96孔细胞培养板，每孔中加0.1ml含2104 ～10104 靶细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），在37℃ 5％CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养2～3小时让细胞帖壁（如果是悬浮细胞可直接进行下一步） 2、用RPMI-1640培养液2～10倍递次稀释细胞因子...

1、培养IL-2依赖细胞株CTLL-2细胞或HT-2细胞（检测IL-2），或者IL-3依赖细胞株FDC-P1细胞或FL5.12细胞（检测 IL-3）到对数生长期。 2、取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml含1104 ～2104 上述细胞之一的DMEM培养液（加10％小牛血清）。 3、每孔加0.1ml系列稀释的待...

1、按MTT检测法培养细胞和用不同稀释度的细胞因子处理细胞。 2、吸去培养液，用PBS洗涤两次（如为悬浮细胞，应在吸去上清液前先离心）。 3、每孔加60l NAG染液，在37℃ 5％ CO2 的饱和水汽CO2 培养箱中培养4小时。 4、每孔加90l终止液，混匀后置酶联检测仪上...

AlamarBlueTM 摄入法 1、按MTT检测法培养细胞和用不同稀释度的细胞因子处理细胞。 2、在培养结束前24小时加入Alamar Blue染料，96孔细胞培养板每孔20l。 3、在培养结束后，直接在酶联检测仪上测定光吸收值。氧化型Alamar Blue的最大光吸收在570nm，用OD570...

1、按MTT法用细胞因子处理靶细胞适当时间，用PBS洗去死亡细胞，洗两次。 2、向96孔细胞培养板各孔中加0.2ml新鲜配制的底物液（0.2mol/L 硼酸，1mmol/L MgCl2 ，1.2mmol/L甲伞基磷酸）。在37℃ 5％ CO2 的饱和水汽CO2 培养箱中培养3小时。 3、在荧光计数仪上测...

1、ATP反应液（Bio-Orbit）是粉末状混合物，含有荧光素、荧光素酶、0.5mmol醋酸镁、50mg BSA和0.1mol无机焦磷酸。在4℃可以保存1个月。用前用10ml含2mmol/L EDTA的0.1mol/L pH7.75 Tris-醋酸缓冲液稀释。稀释液分装后可在－20℃长期保存。 2、在已经完成促增...