3)电泳 电极缓冲液 1 倍TBE（pH 值8.0） 预电泳 30 分钟至1 小时 恒温方式 测序胶板上夹盖铝恒温板 电泳温度 50℃左右 电泳条件 恒功率 90～110W 电泳时间 2.5 小时至5 小时 4)干胶制备和压片 电泳结束后取下胶板，用工具撬开玻璃板，使胶留在其中一块板上。...

物种的遗传多样性在本质上是DNA 一级序列的多样性。近年来，随着DNA 测序技术的迅速发展和日益普及，DNA 测序在遗传多样性的研究中正在起着越来越大的作用。本章将介绍目前在遗传多样性研究中常用的一种手动和一种全自动双链DNA 测序方法。 1.DNA 模板的制备...

尽管核酸序列测定方法越来越成熟、简便并且可以自动化，但事实上，对于一个片段较长、序列未知的待测核酸而言，仍然是一件耗时且繁琐的工作。对于一个待测DNA分子，要制定一个能够简捷准确的测定方案，一般可以从以下几个方面考虑： ⑴ DNA片段大...

[实验原理] 测定DNA的核苷酸序列是分析基因结构与功能关系的前提。从小片段重叠法到加减法、双脱氧链终止法、化学降解法、自动测序，DNA测序技术发展很快。目前在实验室手工测序常用Sanger双脱氧链终止法。Sanger法就是使用DNA聚合酶和双脱氧链终止物测定DNA...

(二)：测序胶的制备 １：玻璃板的处理 Ａ，长板（不带凹槽、反硅化处理，粘胶板） a,２N NaOH浸泡１小时以上，自来水冲洗，海绵或软布蘸洗涤剂将板清洗干净，自来水冲洗掉全部洗涤剂，无离子水中过三遍，晾干。b, 在1ml95%乙醇，0.5%冰乙酸中加入5l粘合硅烷。...

DNA序列的正确测定，是进行基因结构和功能分析，绘制基因图谱、转基因检测等方面工作的重要前提。同时DNA测序技术为快速、简捷分析蛋白序列及结构提供了工具。 DNA序列测定技术是在DNA内切酶、合成酶的应用，基因克隆及亚克隆技术，高分辨率聚丙烯酰胺变性胶...

实验原理] DNA 测序（DNA sequencing）是对DNA 分子的一级结构的分析。其基本原理是DNA 的复制反应体系中需要存在DNA 聚合酶、DNA 模板、寡核苷酸引物和dNTP，引物和模板退火形成双链后，DNA 聚合酶在引物的引导下在模板链上沿35的方向移动，dNTP 按照碱基配...

实验目的： 了解常规DNA序列分析技术（Sanger双脱氧法）的原理及操作步骤。 实验原理： 在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基...

如果两处理间存在较大差异，以及某些基因在Tester中存在上调表达（up-regulated expression）时，用RAD方法则达不到预期目的。于是，Diatchenko. L等于1996年提出了一种可以有效克服基因上调表达所造成不利后果的克隆基因的新方法抑制性扣除杂交（SSH）。该方...

SSR（simple sequence repeat ）技术是另一种非常有用的分子标记技术，在生物体基因组内存在许多重复的简单序列小片断，在不同种内小片断的重复数不同，这种不同的重复数，是由其遗传基因所决定，有种属特异性，这种差异经PCR扩增后，被放大到可检测程度。因...