在胶体中的DNA 可利用毛细现象的作用将DNA 牵引转印至覆盖在胶片上的滤膜，经烘烤或UV 照射后，可使DNA 固定在膜上，以进行探针的杂合（hybridization） 反应。 仪器用具： 玻璃缸；玻璃板或吸水海绵；Crosslinker （Stratalinker 1800, Stratagene） 药品试...
进行杂合反应时所使用的探针若为放射性物质所标定者，杂合讯息可经由放射显影术 （autoradiography） 侦测出来；若为DIG所标定者，则需借助anti-DIG抗体与碱性去磷酸酶 （alkaline phosphatase, AP） 的conjugate,并利用碱性去磷酸酶的酵素活性转现杂合反应讯...
预杂交液的制备：根据要杂交的膜的数量配制预杂交液，每25 ml预杂交液（1~2张膜）的成分组成如下： H 2 O 15 ml 20SSPE 6.25 ml 50Denhardt 2.5 ml 10% SDS 1.25 ml 100 mg/ml鲑鱼精DNA（缓加） 400 ml 1 取适量小麦基因组DNA，用适量的限制性内切酶消化完全...
⑦60伏电泳过夜。 ⑧取出凝胶，水中浸泡2次，每次5min。 ⑨室温下将胶浸到50mmol/L NaOH和10mmol/l NaCl中45min，水解高分子RNA，以增强转...
（1）DAN斑点杂交 ①先将膜在水中浸湿，再放到15SSC中。 ②将DNA样品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。 ③用铅笔在滤膜上标好位置，将DNA点样于膜上。每个样品一般点50l（2～10g DNA）。 ④将膜烘干，密封保存备用。 （2）RNA斑点杂交：与上法类似，每个样品...
一、原位杂交( In Situ Hybridization,ISH) 是用标记的核酸探针，使用非放射检测系统或放射自显影系统，在组织切片、细胞涂片及染色体制片上等对核酸进行定性、定位和相对定量研究的一种分子生物学方法，具有灵敏、特异、直观等优点。已逐渐成为分子生物学和...
将凝胶中的DNA进行碱变性并将pH值恢复至中性后，即可将凝胶中的DNA片段转移到固相支持物上。用于转膜的固相支持物有多种，包括硝酸纤维素滤膜(NCM)、尼龙膜、化学活性膜和滤纸等， Southern转膜时可根据需要选择不同的固相支持物用于杂交。常用的Southern转膜...
实验原理： Southern Blot是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行...
第一天 (restriction enzyme digestion) 1.取待測的genomic DNA，用二次水稀釋10倍 (30l的DNA 加270lddH2O 300l) 2.換算genomic DNA濃度(OD260)，再換算取10g所需的體積。 3.取10g DNA，用限制酵素EcoRI、BamHI各2l切O/N，將total體積調成400l。(最好用1.5mL...
三：操作 (一)转膜 1电泳 2切胶 在紫外下，切取凝胶有条带部分 3脱嘌啉0.25NHCL浸泡凝胶10分钟，蒸馏水洗胶（大于15kb的DNA片段转移时做此步骤） 4变性，变性液（0.5MNaOH、1.5MNaCL）浸泡凝胶2次，每次15分钟，蒸馏水洗胶 5中和,中和液（0.5Mtris-HCL,pH7.0...