3．制备电泳凝胶及电泳 (1)制备胶模：取双块制胶玻板，先用泡沫海绵沾洗洁净液仔细擦洗，用水彻底淋洗，干燥后继用酒精清洗，晾干，再用硅烷剂(repel- silane)将玻板的面擦一遍，蒸馏水淋洗，干燥 (注意：清洗时应戴一次性手套操作)。 将其中一块玻板平置台上...

[目的] 掌握双脱氧链终止法测定DNA序列的原理与方法 [原理] DNA聚合酶催化的DNA链延伸是在3-OH末端上进行的。由于2，3-双脱氧三磷酸核苷酸(ddNTP)的3-位脱氧而失去游离-OH，当它参入到DNA链后，3-OH末端消失，使DNA链的延伸终止。 本实验根据此原理，将待测DN...

3、质粒膜板制备：参照第一章所述的方法。 （二）超螺旋质粒DNA 的碱变性： 1、取4mg（约2pmol）超螺旋质粒DNA 至一eppendorf管中，加无离子水到终体积18ml。 2、加2ml 2mmol/L NaOH/2mmol/L EDTA 溶液，置于室温(25℃下）保温5分钟。 3、加2ml 2mol/L NaAc溶...

（1）过夜培养的宿主细胞(如NM522或JM101)用3ml TYP肉汁培养基以1:100稀释。在37℃强烈震荡1小时之后，细胞进入对数早期。此时，将一个合适的含有重组M13的噬菌斑(连同琼脂)用滴管转入该细胞培养液中。 （2）37℃强烈震荡(300rpm) 培养6小时。 （3）把细胞培...

二、材料待测的DNA 模板，可用双链或单链模板。 三、设备高压电泳仪，测序用电泳槽，照相显影用大号塑料盆，制胶设备，吹风机，放射自显影盒，X-光片。 四、试剂 1、5T7 DNA 聚合酶缓冲液：200mmol/L TrisCl，pH7.5，100mmol/L MgCl2，250mmol/L NaCl。 2、引...

7. 在超纯水中浸洗凝胶两次，每次2分钟，注意在本操作中戴手套拿着胶板边缘避免在胶上印上指纹。 8. 将凝胶置于室温干燥或用抽气加热法干燥。在可见光灯箱或亮白，黄色背景(如纸)上观察凝胶，若需永久保存的记录，则可用EDF胶片保留实验结果。 [注意] 测序产...

（三）电泳： 1、预电泳 （1）当凝胶聚合完全后，拨出鲨鱼齿梳，将该梳子反过来，把有齿的一头插入凝胶中，形成加样孔。 （2）立即将胶板固定在测序凝胶槽中，一般测序凝胶槽的上下槽是分开的，因而只有在固定好凝胶板后，方能加入TBE缓冲液。 （3）稀释10TBE...

3、为阻止Taq DNA 聚合酶延伸非特异性退火引物， 热循环仪必须预热至95℃。温度变换应越快越好。下面的循环时间不包括变温时间。如果你无法确定使用何种模式，建议从模式1开始。 模式1：适用于引物24碱基或GC含量50% 95℃ 2分钟。然后： 95℃ 30秒(变性)，42...

在分子生物学研究中，DNA 的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基...

常见 问题 具体情况 可能原因 处理办法 备注 样品 准备 问题 菌培养不好或失败 抗性不对或 菌体已死 核对抗性，尽可能提供载体信息和新鲜菌液。 . 菌培养条件特殊 重新提供新鲜菌液，或提供2ug纯化质粒。 质粒提不出 或产量很低 质粒拷贝数极低 客户自己采取...