Ⅰ 分光光度法 一、目的 熟练掌握分光光度法检测DNA纯度和浓度的方法。 二、原理 DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在 260nm处。波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。 对标准样品来说，浓度为1...

3.注意事项 （1）避光下准备反应体系：由于光敏生物素醋酸盐对光敏感，应避免光照。在分装试剂及核酸与光敏生物素混合时应在暗室安全灯下操作。 （2）核酸纯度：由于光敏生物素能与任何有机物反应，因此用做标记探针的核酸要高度纯化。用作标记探针的核酸最好...

一、核酸探针标记 核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。 核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同...

该实验主要有两个用途： 1．重组质粒的鉴定。当质粒的重组或其它载体重组后，通常会发生质粒的重组失败，包括质粒的自身环化。因而要求进行筛选，把重组成功的质粒找出来。在目前常用的质粒和其它载体中含有相应的抗生素抗性基因，一旦重组成功，质粒环化（包...

（3）增强子的位置可在基因5上游、基因内或其3下游的序列中，而其作用与所在基因旁侧部位的方向似无关系，因为无论正向还是反向，它都具有增强效应； （4）增强子所含核苷酸序列大多为重复序列，其内部含有的核心序列，对于它进入到另一宿主之后重新产生增强...

一、真核生物的RNA聚合酶 有三种RNA聚合酶：RNA聚合酶Ⅰ；RNA聚合酶Ⅱ；RNA聚合酶Ⅲ。 二、真核基因顺式作用元件 （一）、顺式作用元件概念 指DNA上对基因表达在调节活性的某些特定的调控序列，其活性仅影响其自身处于同一DNA分子上的基因。 （二）、种类 启...

一、原理 大肠杆菌染色体呈环状。高频重组菌株（Hfr）的染色体上整合有F因子，当Hfr细菌与F－细菌细胞发生接合（即杂交）时Hfr细胞（供体菌）的染色体从Hfr细胞向F－细胞内转移。由于染色体的转移具有一定的方向性，并且可以随时中断，因此根据结合后F－细菌...

3、第三天，当噬菌体充分增殖后，将平板表面的半固体培养基转移到无菌的三角瓶中，加入5－10ml LB液体培养基和几滴氯仿，剧烈振荡20秒后离心(3000rpm, 10分钟)，上清液即为P1 cml, clr100裂解液。 4、将上清液移到无菌试管中，加入几滴氯仿，再次剧烈振荡20秒...

一、原理 大肠杆菌可以利用噬菌体为媒介，将供体细胞DNA转移给受体细胞，从而使受体细胞的基因型和表现型发生改变，这一过程称为转导。由类似噬菌体P1和P2介导的转导，能够转移供体染色体上任何一个基因，称为普遍性转导；由噬菌体等为媒介的转导，只能转导半...

一、原理 大肠杆菌l噬菌体的DNA，既可以自主存在于宿主菌中，也可以整合在细菌染色体中，完成溶源化过程。多数温和噬菌体整合进细菌染色体中时都有一特定的位置。大肠杆菌l噬菌体的原噬菌体附着在寄主染色体半乳糖操纵子基因gall被诱导出来时，大约106个l噬菌...