与II型核酸内切酶有关的几个概念 粘性末端：cohesive ends是指DNA分子在限制酶的作用之下形成的具有互补碱基的单链延伸末端结构，它们能够通过互补碱基间的配对而重新环化起来。 平 末 端 ：Blunt end在识别序列对称处同时切开DNA分子两条链，产生的平齐末端...

2.M13噬菌体载体的构建 ⑴ 在IS区内插入 Lac Z基因 ⑵在标记基因区内组装MCS区段 所以能通过a互补在X-Gal/ IPTG平板上识别重组体。这类载体包括了 M13mp8、9 和 M13mp18 、 19等 这类载体的突出优点在于其既可以提供单链DNA，也可以提供双链的DNA。其最大的...

2、pUC质粒载体 1987年，J.Messing和J.Vieria采用MCS技术在pBR322基础上构建的。 结构： （1）来自于pBR322的Ori （2）氨苄青霉素的抗性基因(ampr)。但核苷酸序列发生了变化 （3） LacZ基因 编码半乳糖酶的肽链即氨基末端。 （4）MCS区段 是一段用于插入外源D...

第一节载体 引言 基因克隆的本质是使目的基因在特定的条件下得到扩增和表达，而目的基因本身无法进行复制和表达、不易进入受体细胞、不能稳定维持，所以就必须借助于载体及其寄主细胞来实现。 作为基因克隆的载体必须具备以下特性： ⑴载体必须是复制子。 ⑵...

1．目的 学会DNA片段的体外连接技术。 2．原理 在Mg2+和ATP存在下，T4 DNA连接酶能催化载体分子的粘性末端与外源DNA的相同粘性末端联接成重组DNA分子。 3．器材 旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，台式离心机，干...

1．目的 学会用酶切法或PCR法筛选重组质粒转化成功的克隆菌。 2．原理 利用转化后宿主菌所获得的抗菌素抗性性状筛选出获得质粒的菌落克...

【实验目的】 掌握T克隆的原理和方法。 了解质粒提取的原理和方法。 【实验原理】 外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA 连接酶的作用下，有Mg2+ 、ATP存在的连接缓冲系统中，将载体分子与外源DNA...

【实验原理】 外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA 连接酶的作用下，有Mg2+ 、ATP存在的连接缓冲系统中，将载体分子与外源DNA分子进行连接。Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物，其DNA双链前后末端都有...

（四）目的基因片段与克隆载体的连接 PCR产物经试剂盒纯化回收后，通过T/A克隆的方法，直接与pMD18-T载体连接，连接反应体系如下： 纯化回收的PCR产物 4l Ligation SolutionⅠ 5l pMD18-T Vector DNA 1l 混匀后16℃连接过夜。产物可于-20℃保存。 （五）连接...

【实验原理】 外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA 连接酶的作用下，有Mg2+ 、ATP存在的连接缓冲系统中，将载体分子与外源DNA分子进行连接。Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物，其DNA双链前后末端都有...