1．目的 学会用限制性内切酶切割质粒DNA。 2．原理 II型限制性内切酶能识别双链DNA内部的特殊序列并在识别位点处将双链切断，形成粘性末端或齐平末端，通过电泳酶切后的DNA混合物能够确认和分离酶切片段。 3．器材 旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1...
实验原理： 限制性内切酶（restriction endonuclease, RE）能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。限制性内切酶可分为三类：I、Ⅱ和III类。I类和III类酶在同一蛋白质分子中兼有修饰（甲基化）作用和依...
【实验原理】 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷在电场中向正极移动。由于糖－磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此他们能以相同的速度向正极方向移动。在一定...
构建人VH基因节段文库 [器材和试剂] ● PCR试剂和设备 ● 自pHENl中天然scFv文库制备的scFv基因文库模板DNA（单链和双链DNA 10ng/ul） ● Geneclen试剂盒（Qbiogene） ● PVH3FoR1引物： 5-TCG CGC GCA GTA ATA CAC GGC CGT GTC-3 ● PVH3FORl引物： 5-TCG CG...
[器材和试剂] Winard PCR纯化试剂盒 （Promega） PCR试剂和设备 用于连接scFv和pHENl DNA以及将scFv文库电转化到大肠杆菌TGl株的试剂和设备 FDSEQ引物 扩增的VHCDR3基因文库和VL基因， [方法] 1. 配制4个25ulPCR反应液，包含： 去离子水，10.25ul 10Vent缓冲...
[器材和试剂] ● PCR试剂和设备 ● Geneclean试剂盒（Qbiogene） ● VHFOR随机引物（见下文），10pmol/ul ● LMB3引物 ● VHBACK引物； 5,-TTT GAC TAC TGG GGCCAG GG-3, 10pmol/u1 ● FdSEQ 引物： 5-GAA TTT TCT GTATGAGG-3,10pmol/ul ● 含起始scFv基因的...
器材和试剂] ● PCR试剂和设备 ● Wlzard PCR纯化试剂盒（Promega） ● PVHlOR2引物： 5-GAG TCA TTC TCG ACT TGC GGC CGC TCG CGC GCA GTA ATA CAC GGC CGT GTC-3, ● PVH3FOR2引物：5-GAG TCA TTC TCG ACT TGC GGC CGC TCG CIGC GCA GTA ATA CAC AGC CGT GT...
技术支持资料： 材料 缓冲液和溶液 - 碱裂解液I , 4C 50 mM 葡萄糖 25 mM Tris-Cl (pH 8.0) 10 mM EDTA (pH 8.0) 配制碱裂解液I 约100ml，灭菌，保存在四度。 - 碱裂解液II，新鲜配置，室温保存 0.2 N NaOH （从10N的NaOH新鲜制备） 1% (w/v) SDS 碱裂解液II...
基因组DNA文库用途十分广泛，如用于人类及动植物基因组学研究，基因表达调控研究，分析、分离特定的基因片段等。通常情况下，基因组文库构建的基本流程可以归为四大步骤：分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入...
构建cDNA文库是一种获得目标基因并进一步进行基因重组,基因克隆的重要方法,而在该文库构建中有mRNA 逆转录出cDNA是一步极为关键的操作。mRNA的逆转录主要由MMLV、AMV两种逆转录酶催化合成cDNA，在这个逆转录过程中，模板mRAN及逆转录酶是两个最重要的影响因素...