限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DN...

同步双酶切是一种省时省力的常用方法。选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步。NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳 NEBuffer，以保证100%的酶活性。NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的说明...

前一阵子一直在做双酶切质粒重组，失败了很多次，不过很快改善了 实验方法，用2周重组了14个质粒。现就自己的体会，结合前人的宝贵经验，谈一下质粒重组的一些个人经验。 1、回收PCR产物：在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的选...

酶切的原理： DNA酶切一般分为质粒直接酶切和PCR产物酶切。限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类、Ⅱ类、Ⅲ类。Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)...

一、实验目的 1．通过对DNA的酶切，学会设计构建体外重组DNA分子； 2．根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶； 3．掌握DNA的酶切技术。 二、实验原理 限制性内切酶是从细菌中分离出来的一种能在特异位点切割DNA分子的核酸内切酶，目前已从多种细菌中分离出...

快速细胞破碎法实验步骤 1、 挑取转化平板上的单菌接种于含相应抗生素的2ml LB中，37℃振荡培养至A590值为0.6～0.8。 2、 取1ml菌液至1.5ml Eppendorf管中，9000rpm离心9min，去尽上清。 3、 加入70l Cracking Gel缓冲液[1mol/L Tris HCl(pH6.8)10ml,20%SDS 1...

一、实验目的 1．通过对DNA的酶切，学会设计构建体外重组DNA分子； 2．根据目的基因合理选择载体与限制性内切酶； 3．掌握DNA的酶切技术。 二、实验原理 限制性内切酶是从细菌中分离出来的一种能在特异位点切割DNA分子的核酸内切酶，目前已从多种细菌中分离出...

如今，质粒载体中限制酶切位点的种类极为繁多，因而通常都有可能找到某种带限制酶切位点恰恰与外源DNA片段本身毫无二致的载体。这就具备一个不可比拟的优点，也应是可以用相应的限制酶消化重组质粒崦回收外源DNA。 另一种方案，则是把片段插入到载体中能产生...

药品试剂： 纯化的gusA 片段及pQE31 BamHI/HindIII 片段 1% 6-well agarose gel DNA 标准分子量 （Mr, 0.5 g/L） 方法步骤： 1） 取4 支微量离心管，依下表加入DNA, TE-8.0 及追踪染剂 （L）： 2） 短暂离心混合后，将各管样品置65℃水浴5~10 min 后，移至冰...

下表中列出了最适温度不是37C的 限制性内切酶在 37C条件下的酶活性。 酶 最适温度 37 ℃ % 活性 Apa I 25℃ 100* ApeK I 75℃ n/a Apo I 50℃ 50 Bae I 25℃ 20 Bcl I 50℃ 50 BfuA I 50℃ 25 BpuE I 25℃ 20 Bsa I 55℃ 10 BsaB I 60℃ 20 BsaJ I 60℃ 20 B...