一：仪器:同cDNA文库构建技术-cDNA链的反转合成 二：试剂:EcoRⅠ连接子试剂盒 三：操作: 1:cDNA加接头反应 a:按下表准备反应体系 10缓冲液T4DNA连接酶3l BSA 3l cDNA 2.5l 连接子 1l T4DNA连接酶 1l 加水至 30l b: 15℃保温6-18小时 c:70℃加热10分钟后放置于...

DNA的克隆是指在体外将含有目的基因或其它有意义的DNA片段同能够自我复制的载体DNA连接，然后将其转入宿主细胞或受体生物进行表达或进一步研究的分子操作的过程，因此DNA克隆又称分子克隆，基因操作或重组DNA技术。DNA克隆涉及一系列的分子生物学技术，如目的...

酶切 直接在回收PCR产物的试管中配置酶切体系： PCR产物酶切－制作插入片断 公用Buffer 6l 酶 I 3l 酶 II 3l PCR产物 双蒸水 48l 合计 60l 要将PCR产物接入的质粒载体A，取A质粒3l进行酶切。 A质粒酶切－制作载体片断 公用Buffer 3l 酶 I 1l 酶 II 1l 质粒 3l...

本方法的核心部分是医科院基础所的生化脂蛋白组的吴刚老师所创，我在其基础上进行了一些改动，主要是DNA回收上采取了更简单的方法。（本方法最适用于双酶切制作片断并进行克隆的情况。对于分步酶切制作片断，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）...

T4噬菌体DNA连接酶不同于大肠杆菌DNA连接酶，它可以催化平端DNA片段的连接（Sgaramella和 Khorana，1972;Sgaramella和Ehrlich，1978），由于DNA很容易成为平端，所以这是一个极为有用的酶学物性。有了这样的物性，才能使任何DNA分子彼此相连。 优点： 1、没有...

1 转座子及转座子标签法克隆基因 基因标签法克隆植物组织中的基因是较为常用的一种方法，T-DNA和转座子均可作为基因标签。 转座子最早由美国的细胞遗传学家Mc-clintock在玉米中发现，它是指基因组中一段特定DNA片段，能在转位酶的作用下从基因组的一个位点转...

人类基因组计划的主要任务之一就是要从大片段基因组区域或整条染色体DNA 上鉴定出基因表达序列(gene expressed sequences)或转录单位(transcription units)。在人类基因组30亿个碱基对中，发生转录的表达序列(即基因)仅占总序列的3～5％。基因组中绝大部分是...

基因(gene)是遗传物质的最基本单位,也是所有生命活动的基...

DNA重组技术包括载体及外源DNA片段的酶切消化、目的片段的获得及纯化、目的片段与克隆载体的体外连接、重组子的筛选和鉴定等内容。DNA片段的克隆技术是分子操作的核心部分。 实验目的： 学习DNA的酶切、纯化及外源片段与载体的连接，将BAC克隆所携带的外源DNA...

克隆（Clone）是指通过无性繁殖过程所产生的与亲代完全相同的子代群体。分子克隆（Molecular Cloning）是指由一个祖先分子复制生成的和祖先分子完全相同的分子群，发生在基因水平上的分子克隆称基因克隆（DNA克隆）。其基本原理是：将编码某一多肽或蛋白质的...