1实验原理 DNA重组分子在体外构建完成后，必须导入特定的受体细胞，使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状，这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化。对于不同的受体细胞，往往采取不同的转化战略。 1.1 DNA重组分子的常用转化方法 1.1.1 C...

1 目的：DNA 扩增标准化操作规范适用于HLA试验中的DNA 扩增操作。 2 适用范围：DNA 基因分型实验室。 3 依据：DNA 扩增标准化操作规范 4 引用文件：德国BAG公司（以下简称BAG）《Instructions for use Instructions for use HISTO TYPE/DNA -ABDR 384》 5 程...

实验目的 制备出感受态细胞，把体外重组的DNA引入受体细胞，使受体菌具有新遗传性，并从中选择出转化子。 实验原理 感受态就是细菌吸收转化因子的生理状态，只有发展为感受态的细胞才能稳定摄取外来的DNA分子。pUC18的LacZ基因区域当有DNA片段插入时，LacZ基...

对于亚克隆来说，酶切-连接可谓是最经典的方式。虽说效果不错，可着实有些麻烦。载体和片段分别酶切、跑胶、回收，再加上连接和转化，一星期转眼就过去了。做表达的那是没办法，载体上只有多克隆位点，那我们只能配合。对于只是想克隆保存或测序的同学来说，...

一、核酸的纯化 在分子克隆的所有操作中，最基本的操作是核酸的纯化。其关键步骤是去蛋白质，通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时，可进行这种抽提。然而，如要从细胞裂解液等复杂的分子混...

一、限制性内切酶 限制性内切酶（restriction endonucleases，RE）是其中最重要的工具酶之一。它是一类核酸水解酶，能识别和切割双链DNA分子中的特定核苷酸序列。 （一）命名原则 限制性内切酶大多从细菌中发现，根据来源进行命名，限制酶的第一个字母（大写...

在作为载体时，这些噬菌体有一个很大的优点，即克隆到M13mp载体的外源DNA片段（双链），在子代噬菌体便成为了单链形式。故应用M13mp进行克隆，可方便地分离到大量含有外源DNA某一单链的DNA分子。这种单链DNA可在下列工作中作模板：①主要用作双脱氧链终止法进...

二、噬菌体载体 作为细菌寄生物的噬菌体，大多数具有编码多种蛋白质的基因，能利用宿主细胞的蛋白质合成体系，进行生长和增殖。构建的噬菌体载体，以噬菌体、M13和粘粒最为常用。 ㈠ 噬菌体载体 野生型DNA是一种基因组为4.8 kb的线性双链DNA，全部序列已知，...

载体（vector）是携带靶DNA（目的DNA）片段进入宿主细胞进行扩增和表达的运载工具。常用的载体是通过改造天然的细菌质粒、噬菌体和病毒等构建而成。目前已构建成的载体主要有质粒载体、噬菌体载体、病毒载体和人工染色体等多种类型，亦可根据其用途不同分为克...

当多克隆位点有外源DNA片段插入时，破坏此酶的N端阅读框架，产生无互补功能的N端片段，因此在带有外源DNA片段的细菌在含有IPTG/X-gal的培养基上呈白色，见图7-11 。 如果外源DNA插入片段相当短，不破坏-半乳糖苷酶的氨基端氨基酸序列的阅读框，有时产生的重组...