《乳腺癌患者血清 tsRNA 检测流程标准化及临床应用专家共识》要点梳理
tsRNA：tRNA 衍生小 RNA（tRNA‑derived small RNAs），属于新型非编码 RNA 液体活检标志物，本共识聚焦血清样本，规范分析前‑分析中‑分析后全流程及乳腺癌临床应用，发表于《临床检验杂志》2026 年第 7 期。 ⚠️重要提示：血清 tsRNA 目前尚未完全常规临床普及，不能单独作为确诊金标准，需结合影像学、病理、肿瘤标志物综合判断。
一、概述
tsRNA 包含 tRF、tiRNA 两大类，在乳腺癌增殖、侵袭转移、药物耐药中发挥调控作用；血清中稳定存在，适合液体活检；但样本处理、RNA 提取、修饰干扰、检测平台差异大，缺乏统一标准，该共识用于统一实验室操作与临床解读路径。
二、分析前质量管理（样本采集‑处理‑保存，共识强推荐）
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采血要求
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采用无抗凝促凝血清管；禁止 EDTA 血浆直接替代血清（血小板释放 tsRNA 干扰结果）。
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空腹静脉采血 5‑8 mL；避免溶血，溶血样本直接弃用（红细胞 tRNA 大量释放，结果严重偏移）。
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凝固与离心
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室温静置凝固30 min；1000‑1300 g，室温离心 10 min，分离上层血清。
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二次离心去除残留细胞 / 血小板碎片：12000‑13000 g 4 ℃离心 10 min。
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分装与保存
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分装为小体积（200‑500 μL / 管），避免反复冻融；反复冻融≤2 次。
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短期（＜7d）‑20 ℃；长期储存‑80 ℃；禁止‑80℃以外温度长期存放。
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样本排除标准
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溶血、脂血重度样本；样本凝固不全；反复冻融超标；合并急性感染、其他恶性肿瘤的患者样本建议备注，作为结果解读干扰因素。
三、分析中：标准化实验室检测流程
1. RNA 提取
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推荐使用适合血清小 RNA 的商业化试剂盒；血清起始量建议≥400 μL。
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tsRNA 存在大量 RNA 修饰（m¹A、m³C 等），必须做去修饰预处理，否则反转录失败、定量严重偏低，这是 tsRNA 区别普通 miRNA 的关键操作中华医学期...。
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RNA 质控：小 RNA 片段占比合格；A260/A280 控制 1.8‑2.1；禁止 DNA 污染。
2. 检测技术选择
表格
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检测平台 |
适用场景 |
共识评价 |
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Bulge‑loop qRT‑PCR |
临床样本批量检测、候选 tsRNA 标志物验证 |
优先推荐，操作简便，成本适中，适合临床转化PMC |
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小 RNA 高通量测序 (sRNA‑seq) |
标志物筛选、新 tsRNA 发现 |
科研为主，检测周期长，成本高，不适合常规临床 |
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数字 PCR (dPCR) |
低丰度 tsRNA 精准定量 |
可作为复核手段 |
不建议普通 miRNA 通用引物直接用于 tsRNA 检测，tsRNA 末端结构特殊，需要专用反转录引物体系中华医学期...。
3. 内参选择
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不推荐 U6 单一内参；共识建议多 tsRNA 组合内参，或结合外参 spike‑in 校正血清 RNA 提取、反转录损失。
4. 方法学性能验证
实验室开展检测前必须完成：精密度、重复性、特异性、样本稳定性、参考区间建立；不同平台结果不可直接比对。
四、分析后：报告与质量控制
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报告内容：检测 panel 标志物名称、相对表达量 / 拷贝数、内参信息、样本状态备注；禁止出具 “确诊乳腺癌” 结论。
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室内质控：每批次带阴性、阳性质控；建议定期参加室间质评。
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注意：不同实验室、不同试剂盒之间 tsRNA 绝对数值不能直接互认。
五、临床应用推荐（共识分级）
血清 tsRNA不能替代病理诊断，主要用于辅助评估，不推荐普通人群大规模乳腺癌筛查。
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乳腺癌辅助诊断（Ⅱb 类推荐）
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适用场景：乳腺影像 BI‑RADS 4 类，病理取材困难者；联合 CA15‑3、CEA 等传统标志物，提升早期乳腺癌检出效能。
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部分标志物：tDR‑781673 上调；tRF‑Gly‑CCC‑046、tRF‑Tyr‑GTA‑010、tRF‑Pro‑TGG‑001 下调，组合 panel 诊断效能优于单分子标志物PMC。
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局限：对良性乳腺疾病存在一定交叉，不可单独作为确诊依据。
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疗效动态监测（Ⅱb 类推荐）
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新辅助化疗、靶向治疗、内分泌治疗期间动态随访：治疗有效时肿瘤相关 tsRNA 表达向正常水平回调；持续高表达提示疗效不佳。
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可用于赫赛汀耐药、他莫昔芬耐药相关 tsRNA 标志物检测，辅助提示耐药风险，不能单独作为换药依据PMC。
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预后风险评估（Ⅲ 类推荐，科研向临床过渡）
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部分 tsRNA 表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM 分期、Ki‑67、无病生存、总生存相关；用于复发风险分层参考，需结合临床病理指标共同评估，不单独用于预后判断。
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不推荐场景 1）普通健康人群普通体检做乳腺癌筛查； 2）单凭 tsRNA 结果决定手术、化疗、靶向药物方案； 3）不同实验室结果直接对比。
六、干扰因素与局限性
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干扰：溶血、反复冻融、合并其他肿瘤、严重炎症、样本处理不规范，会显著改变 tsRNA 水平。
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局限性：尚无全国统一参考区间；不同亚型乳腺癌标志物谱存在差异；仍属于转化阶段标志物，证据等级低于病理、影像学。
七、共识总结要点
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血清 tsRNA 样本处理必须严格防溶血、控冻融，必须做 tsRNA 特异性去修饰预处理，区别于 miRNA 检测流程。
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qRT‑PCR 为现阶段临床转化首选方法，报告只提供分子检测结果，不直接下临床诊断。
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临床定位：辅助诊断、疗效监测、预后参考，需联合病理、影像、传统肿瘤标志物，不能单独作为确诊、治疗决策唯一依据。
免责声明：以上为专家共识公开要点整理，仅供检验、临床学习参考，具体临床实践以原文及临床医师综合判断为准