嵌合抗原受体修饰 T 细胞（CAR‑T 细胞）制剂制备质量管理规范

一、核心定位与适用范围

二、基本原则（四大核心）

1. 总体要求

• 建立覆盖全生命周期的质量管理体系，所有操作必须遵循验证后批准的 SOP，并完整记录。
• 严格区分自体 / 异体制备流程，异体需额外增加HLA 配型、血型匹配、供者传染病筛查。
• 全程无菌控制为第一优先级，CAR‑T 不可终端灭菌，污染控制贯穿始终。

2. 人员管理

• 制备 / 质控人员需具备细胞培养、病毒操作、无菌技术资质，经专项培训并考核合格上岗。
• 建立健康档案、卫生与防护规程，感染性样本区人员需专用防护装备。
• 非专业人员进入洁净区需审批 + 培训，明确主 / 辅操作人员职责。

3. 物料管理

• 所有试剂、耗材、培养基、细胞因子、包装材料必须有合格证明、唯一批号、来源可追溯。
• 尽量避免动物 / 人源血清；确需使用需验证必要性与安全性，严禁疫区来源血清。
• 自制试剂（如冻存液、刺激因子）需自建质量标准、检验合格后方可使用。

4. 设施与设备

• 按GMP 洁净级别分区（如 C 级背景 + A 级局部），感染性样本需独立制备区。
• 关键设备（细胞分离机、生物反应器、培养箱、液氮罐）定期校准、验证、清洁与维护。
• 优先采用一次性封闭系统，降低交叉污染风险。

三、载体制备（质粒 / 病毒 / 非病毒）

1. 质粒制备

• 构建、扩增、纯化、检定全流程验证，检测纯度、浓度、酶切图谱、测序、内毒素、无菌。
• 建立主质粒库、工作质粒库，严格传代控制与稳定性考察。

2. 病毒载体制备（慢病毒 / 逆转录病毒）

• 包装细胞库全面检定（无菌、支原体、外源因子、致瘤性）。
• 病毒收获、纯化、浓缩后检测：物理滴度、转导滴度、RCR/RCL、纯度、宿主 DNA / 蛋白残留、内毒素、无菌。
• 严格控制载体拷贝数（VCN），降低插入突变风险。

3. 非病毒载体制备

• 验证转染效率、细胞毒性、基因整合 / 表达稳定性，控制杂质残留。

四、CAR‑T 细胞制备全流程

1. T 细胞采集与分离

• 采用全自动血细胞分离机采集 PBMC，一次性管路，设备定期验证。
• 分离、分选、活化前检测细胞计数、活率、表型；感染性样本在专属区域操作。
• 接收样本需核对唯一识别码、传染病筛查结果、知情同意、治疗方案。

2. CAR‑T 细胞制备核心步骤

• 活化：采用符合质量标准的抗体 / 磁珠刺激，控制活化强度与时间。
• 转导 / 转染：验证效率、特异性、细胞活率、增殖能力；病毒转导需RCR/RCL 检测。
• 扩增：在封闭系统中培养，监控温度、CO₂、pH、渗透压、细胞密度、活率、代谢物（葡萄糖 / 乳酸），适时补液 / 分瓶。
• 收获：新鲜制剂直接质控放行；冻存制剂采用全封闭冻存袋，气相液氮（‑196℃）保存。
• 批号与留样：每批唯一批号；留样至少保存至使用结束后 3 个月。

五、质量控制（QC）核心项目（必检）

1. 安全性检测（一票否决）

• 无菌检查（细菌 / 真菌）、支原体检测、细菌内毒素（＜5 EU / 剂）。
• 病毒载体产品：**RCR/RCL（复制型病毒）** 阴性。
• 工艺残留：宿主 DNA / 蛋白、质粒残留、牛血清白蛋白、磁珠残留、核酸酶残留等。

2. 质量属性检测

• 细胞活率：≥70%（冻存复苏后≥50%）。
• 细胞数量：满足临床剂量要求（通常≥1×10⁶‑1×10⁸ CAR‑T 细胞 /kg）。
• 表型纯度：CD3⁺、CD4⁺/CD8⁺比例、CAR 阳性率（通常≥20%‑50%，按产品设定）。
• 载体拷贝数（VCN）：控制在安全范围（通常＜5 copies/cell）。

3. 生物学效力检测

• 体外杀伤活性：对靶细胞的特异性裂解率（如 LDH 法、流式法）。
• 细胞因子分泌（如 IFN‑γ、TNF‑α），评估功能激活状态。

六、冻存、运输与复苏

• 冻存：程序降温（‑1℃/min 至‑80℃），转入气相液氮；验证冻存 / 复苏后活率、纯度、效力。
• 运输：采用干冰（‑80℃）或液氮罐，全程温控记录，运输 SOP 验证。
• 复苏：快速解冻（37℃水浴），洗涤去除冻存保护剂，立即检测活率与功能。

七、制剂放行（核心规则）

• 放行需质量受权人签字批准，所有检测项目全部合格方可放行。
• 放行必检项目：无菌、支原体、内毒素、活率、数量、CAR 阳性率、VCN、RCR/RCL、杀伤活性、残留检测。
• 紧急回输可采用快速检测放行，但需同步完成常规检测，不合格立即启动应急预案。

八、追溯与偏差管理

• 建立完整追溯链：从供者 / 患者→样本采集→物料→载体→细胞制备→质控→放行→运输→回输→留样。
• 任何 ** 偏差（工艺偏离、检测异常、污染）** 必须记录、调查、评估、处理并 CAPA 整改，严禁隐瞒。

九、配套法规与更新

• 本规范为基础标准，需同步遵循：
  • 《细胞治疗产品生产质量管理指南（试行）》（CFDI，2022）
  • 《CAR‑T 细胞制剂质量控制与放行检验规范》（团体标准，2025）
  • 《中华人民共和国药典》（三部）相关要求