白血病 / 淋巴瘤免疫分型检测质量控制指南（核心要点）

一、分析前质量控制（源头质控，最易失控）

1. 样本标识与申请

• 样本必须贴唯一条码 / 标签，含患者 ID、采集日期 / 时间、样本类型（骨髓 / 外周血 / 组织 / 脑脊液）。
• 申请单需附：初步诊断、年龄、性别、近期治疗（化疗 / 放疗）、采样时间、送检医师。

2. 抗凝剂与保存时限（核心）

• 超过时限但不可替代样本（如骨髓）不得拒收，需在报告注明 “样本超时，部分抗原（如 CD138、CD16）可能假阴性”。

3. 采集与运输

• 骨髓干抽时可取2–3cm 骨松质（不固定），报告注明 “样本稀释”。
• 新鲜组织（淋巴结 / 脾脏）：用0.9% 盐水纱布包裹或 RPMI 培养液，4–16℃运输，避免脱水 / 自溶。
• 运输：防漏双层包装，保持细胞活性；过夜样本 4–16℃保存。

二、分析中质量控制（技术核心，全程监控）

1. 样本前处理

• 全血 / 骨髓：首选全血溶血法；胞内抗原需先透膜处理。
• 组织样本：机械解离（避免酶消化导致抗原改变），50μm 滤网过滤，细胞数调至0.2–2.0×10⁶/ 管。
• 细胞活性评估：延迟 / 化疗 / 组织样本必做；** 活性 < 75%** 需注明，不可替代样本仍需检测并报告异常群体。
• 免疫球蛋白染色：PBS 充分洗涤，必要时 37℃孵育去除非特异性结合。

2. 仪器与试剂质控

• 仪器：每日校准荧光通道、FSC/SSC、荧光强度；定期做性能验证（精密度、线性、分辨率）。
• 抗体：
  • 采用多色组合 panel（推荐≥8 色），覆盖谱系标记、分化阶段、异常表型。
  • 每批号试剂做阴 / 阳性对照、滴度验证，记录荧光强度、阳性率。
  • 关键标记：CD45/SSC 设门，CD19/CD5/CD20（B 细胞）、CD3/CD4/CD8（T 细胞）、CD13/CD33（髓系）等。
   

3. 室内质控（IQC）

• 每日检测前运行正常 + 异常水平质控品（商品化全血质控优先），与患者样本同批处理。
• 用Levey‑Jennings 图监控，执行Westgard 多规则（1‑3s/2‑2s/R‑4s），失控立即排查（仪器 / 试剂 / 操作）并记录。
• 精密度要求：批内 CV<10%，日间 CV<15%；关键亚群（CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺、CD19⁺）CV<10%。

4. 设门与分析规范

• 标准设门：CD45/SSC区分白细胞群，排除碎片 / 死细胞 / 红细胞。
• 异常细胞：明确比例、表型组合、克隆性（如 κ/λ 轻链限制）。
• 微小残留病（MRD）：采用高灵敏度方案，细胞数≥1×10⁶，抗体浓度适配。

三、分析后质量控制（结果闭环，临床对接）

1. 报告审核与签发

• 双人审核：技术人员初审 + 高级职称复核，异常结果（原始细胞 > 20%、罕见表型）需集体讨论。
• 报告要素：
  • 患者信息、样本类型 / 状态、检测方法（流式）、抗体 panel。
  • 各细胞群比例、绝对计数、表型描述（如 CD19⁺CD5⁺CD23⁺克隆性 B 细胞占 45%）。
  • 结论：提示诊断 / 分型（如 “符合 B‑CLL/SLL 表型”）、局限性（样本活性 / 超时）、建议（结合形态 / 遗传 / 分子）。
   

2. 室间质评（EQA）与比对

• 必须参加国家级 / 省级室间质评（如国家卫健委临检中心），每年≥2 次。
• 质评不合格：启动偏差调查（仪器 / 试剂 / 操作），形成整改报告并记录。
• 无质评项目：开展实验室间比对（≥3 家），符合率 > 80%。

3. 记录与溯源

• 全流程记录：样本接收、处理、仪器参数、试剂批号、质控数据、分析日志、报告审核轨迹。
• 数据保存≥5 年，支持追溯与偏差分析。

四、人员与管理要求

• 人员：经专业培训 + 考核上岗，定期复训（流式原理、质控规则、异常判读）。
• 体系：按ISO15189建立质量管理体系，覆盖全流程 SOP、仪器维护、试剂管理、人员授权。
• 持续改进：定期分析质控数据、室间质评结果、临床反馈，优化流程。