第一部分 蛋白质的表达、分离、纯化 目的要求 （1）了解克隆基因表达的方法和意义。 （2）了解重组蛋白亲和层析分离纯化的方法。 实验原理 克隆基因在细胞中表达对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理...

1．目的 了解外源基因在原核细胞中表达的特点和方法。 2．原理 外源基因克隆在含有lac启动子的表达系统中。先让宿主菌生长，lac I产生的阻遏蛋白与lac操纵基因结合抑制下游的外源基因转录。向培养基中加入诱导物IPTG（异丙基硫代-b-D-半乳糖），解除抑制使外...

差异基因表达的研究受到了广泛的关注，常用的技术有DD-PCR；GENE-FISHING；GENE CHIP等。简单介绍如下： DDRT -PCR技术即mRNA差异显示聚合酶链式反应技术，此技术是以PCR技术和聚丙烯凝胶电泳技术为基础，结合银染或放射性自显影等显色技术，能快速有效地鉴...

谢浩 杨程 陈丽娥 (武汉理工大学生物科学与技术系，武汉430070) 摘要：多肽融合标签能够赋予目标蛋白新的特性，便于目标蛋白的定位、追踪、纯化以及结构和相互作用研究．但在很多情况下，尤其是研究蛋白质结构或分离纯化药用蛋白时，需要将多肽融合标签从融合...

5端非翻译区的二极结构影响到调控蛋白与帽结构的接近，阻碍40S前起始复合体的装配和在mRNA上的扫描，起负调控的作用。但若二极结构位于 AUG的近下游，（最佳距离为14 nt），将会使移动的40亚基停靠在AUG位点，增强起始反应。真核的系列翻译起始因子可使二极结...

原核生物基因表达的调控主要在转录水平上进行，而真核生物由于RNA较为稳定，所以除了存在转录水平的调控以外，在翻译水平上也进行各种形式的调控。 在蛋白质生物合成的起始反应中主要涉及到细胞中的四种装置,这就是:1.核糖体,它是蛋白质生物合成的场所;2.蛋白...

一般直接用SDS凝胶加样缓冲液裂解，具体方法如下： [试剂与设备] （1）表达待检测蛋白质的细菌。 （2）50mmoL／LTris-HCl（pH7.4）。 （3）2xSDS凝胶加样缓冲液： 100mmol／L TrisHCl（pH6.8） 200mmol／L 二硫苏糖醇（DTT） 4％ SDS（电泳级） 0.2％ 溴酚蓝...

经醋酸纤维、琼脂(糖)、聚丙烯酰胺电泳分离的各种生物分子需用染色法使其在支持物相应位置上显示出谱带，从而检测其纯度、含量及生物活性。蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、核酸及酶等均有不同的染色方法，现分别介绍如下： 一、蛋白质染色 染色液种类繁多，各种染色...

原 理 以醋酸纤维薄膜为支撑物，浸入pH8.6的缓冲液后吸去多余液体。将微量血清点于膜上，电泳后，将薄膜置染色液中使蛋白质固定并染色，洗去多余染料。 操 作 1．准备与点样 (1)将薄膜切成2.58cm的小片。在薄膜无光泽面(正面)的一端约2cm处用铅笔划一线，以标...

原 理 将血清脂蛋白用脂类染料(如苏丹黑或油红O等)进行预染。再将预染过的血清置于琼脂糖凝胶板上进行电泳分离。通电后，脂蛋白向正极移动，并分离为几个区带。 操 作 1．预染血清：血清0.2ml加苏丹黑染色液0.2ml于小试管中，混合后置37℃水浴染色30分钟，然...