酶标抗体和酶-抗酶复合物的应用于细胞ELISA 应用酶标抗体进行免疫测定的方法较多，非均相酶免疫测定是目前应用最广泛的一类酶免疫检测技术，其中以酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent aay，ELISA）最常用，它可用于测定抗体，也可测定可溶性抗原...

酶标抗体的质量鉴定与保存 1． 酶活性和抗体效价测定 采用双向免疫扩散法（稀释抗体）和DAB-H2O2显色反应检测结合物中抗体效价和免疫沉淀线中的酶促反应。 2． 酶量和IgG量 酶量（mg/ml）=OD4030.4 IgG量（mg/ml）=（OD280-OD4020.42）0.940.62 其中，0.42为...

改良过碘酸钠标记法制备酶标抗体 HRP分子中与酶活性无关的糖基被过碘酸钠氧化为醛基，再与抗体蛋白的氨基形成Schiff碱。为了防止酶蛋白的氨基与醛基发生自身偶联，在标记前先用2，4-二硝基氟苯(DNFB)封闭酶蛋白中残留的a-和e-氨基。酶与抗体的结合反应后，再...

戊二醛二步交联法制备酶标抗体 戊二醛（glutaraldehyde，GA）：是一种常用的同型双功能交联剂，它的两个醛基可分别与HRP和抗体蛋白的氨基形成Schiff碱（-N=C-），将他们以五碳桥连接起来。戊二醛连接反应是最温和的交联反应之一。可在4-40℃范围，pH6.0-8.0的...

果蝇类标本的辣根过氧化物酶标记试剂染色检测操作步骤 (1)样品洗毕后(见前)，悬于含1％正常羊IgG的中。在1．5ml锥形管中胚胎或其他样品所占体积应少于50txl，或在5mlap-top管中应少于200／A。摇动孵育1h。 (2)用洗2次。 (3)加一抗：用含蛋白质的溶液，如含羊I...

果蝇类标本的辣根过氧化物酶标记试剂染色检测 酶标试剂的检测是利用可溶性的色原物质经酶促作用发生沉淀反应，在酶反应部位产生不溶性的有色物质(Avrameas and Vriel 1996；Nakane and Pierce 1967 d，b；Avrameasl972)。每种酶可利用一定范围的底物，但对于...

在果蝇类标本内加人抗体及酶标试剂染色检测 一旦果蝇类标本被固定及透化处理后，便可加入抗体。如同其他免疫组化技术一样可以直接用标记的一抗，或者通过标记的二级试剂(能与一抗特异性结合)进行检测。一般而言，直接标记一抗产生的信号更为清晰，背景较低。...

半乳糖苷酶标记试剂 半乳糖苷酶已被广泛用于酶标记免疫分析，但主要用于免疫细胞化学。一种较好的底物是5溴4氯3吲哚D吡喃型半乳糖苷(BCIG)，它可以产生一种深蓝色的产物。此产物在乙醇和水中稳定，不溶解。 1．需要的溶液、试剂和特殊设备 BCIG； N，N二甲基...

碱性磷酸酶标记试剂 BCIP／T是碱性磷酸酶最常使用的呈色底物，碱性磷酸酶标记的试剂应该用真核生物的碱性磷酸酶，因为这种酶容易被EDTA灭活。细菌酶难以终止其活性，易引起显色过度，导致较高背景。 BCIP／T底物在酶结合位点形成强烈的黑紫色沉淀，此反应是一...

辣根过氧化物酶标记的试剂 底物范围较广，包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。 二氨基联苯胺／金属盐 DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物，在水和醇中不溶解。多数情况下，推荐在DAB中加入不同的金属离子。当加入金属盐...