在果蝇类标本内加人抗体及酶标试剂染色检测

一旦果蝇类标本被固定及透化处理后，便可加入抗体。如同其他免疫组化技术一样可以直接用标记的一抗，或者通过标记的二级试剂(能与一抗特异性结合)进行检测。一般而言，直接标记一抗产生的信号更为清晰，背景较低。不足之处在于如检测多种抗原，就需分别制备和纯化相应的多种标记一抗。因此，除了特殊情况以外，一般推荐使用间接法，该法所需的二抗检测试剂可从商业经销处购买。

在大多数情况下推荐用酶标试剂，因其敏感度较高，使用普通的光学显微镜就可以观察结果；如需要高分辨率或同时定位2种抗原时，推荐用荧光染料标记试剂，但其检测需要使用荧光显微镜或共聚焦显微镜。

在抗原制备过程中研究者常采用几种方法固定果蝇类标本，这就使得抗原经受的处理更为强烈，通常会遇到较高背景的问题。在果蝇类标本的免疫组化染色中，为消除较高背景可将样本与正常羊血清预先孵育。大部分标记二抗试剂是羊抗鼠或羊抗兔免疫球蛋白抗体。因而，最好选用非免疫羊的天然抗体来封闭非特异交互反应性位点，从而降低背景。此外，通过降低抗体浓度并孵育过夜亦可降低背景