（一）原理 细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。因此，提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并除去。将细胞置于含有十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）的缓冲液中，加等体积水饱和酚，通过剧裂振荡，然后离心形成上层水相和下层...
一、目的： 学习和掌握从酵母中提制RNA 的原理和方法，从而加深对核酸性质的认识。 二、原理： 提取和制备RNA 的首要问题是选RNA 含量高的材料。微生物是工业上大量生产核酸的原料，其中RNA 的提制以酵母最为理想，因为酵母核酸中主要是RNA（2.67～10.0%），D...
[附2]二苯胺显色法测定DNA含量 原理 脱氧核糖核酸中的2-脱氧核糖在酸性环境中与二苯胺试剂一起加热产生蓝色反应，在595nm处有最大光吸收。 DNA在40-400 g范围内，光吸收与DNA的浓度成正比。在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应灵敏度。除DNA外，脱氧木糖、...
原理 细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。因此分离RNA时必须使RNA 与蛋白质解离，并除去蛋白质。除去蛋白质的方法主要有：（1）用氯仿－辛醇混合液剧烈振荡，使蛋白质变性。（2）在冷的2mol/L盐酸胍溶液中沉淀 RNA，大部分蛋白质仍处...
经典抽提小技巧 1： Phenol 纯化：将等体积的 1:1 Phenol/Chloroform 加入，剧烈混允 1-2 分钟。高速离心 2 分钟。小心取上清 (80-90%)。决不能取到中间层。可以使用等体积的反应液加入 Phenol/Chloroform 中，同样再取出上清。将两次的上清混在一起用于核酸...
RNA 抽提的三大纪律八项注意 纪律一：杜绝外源酶的污染。 注意一：严格戴好口罩，手套。 注意二：实验所涉及的离心管，Tip 头，移液器杆，电泳槽，实验台面等要彻底处理。 注意三：实验所涉及的试剂/溶液，尤其是水，必须确保 RNase-Free。 纪律二：阻止内源...
3：裂解液的选择 影响操作方便程度，内源杂质残留的因素 常用的裂解液几乎都能抑制 Rnase 活性，因此，选择裂解液的重点是要结合纯化方法一起考虑。只有一个例外：高内源酶含量的样品建议使用含苯酚的裂解液，以增加灭活内源酶的能力。 4：纯化方法的选择 影...
背景介绍 实验前方法/试剂的选择 问题解答 (外源性污染导致的问题不在本解答考虑中) RNA 抽提的三大纪律八项注意 Rnase 污染的10大来源 RNase 和 DEPC 处理 RNA 抽提的10大窍门 提高 RNA 得率 经典抽提小技巧 特殊组织的抽提 样品冻融的影响 RNA 质量的判断 R...
（一）试剂准备 1 ． TRIzol 试剂。 2 ．氯仿 3 ．异丙醇 4 ． 75% 乙醇（ DEPC H2O 配制） 5 ． DEPC H2O （二）操作步骤 1 ． 样品处理： （１）培养细胞：收获细胞 1-510 7 ，移入 1.5ml 离心管中，加入 1ml Trizol ，混匀，室温静置 5min 。 （２）组织：...
原理 核酸在机体生命活动中具有重要意义，核酸可分为核糖核酸和脱氧核糖核酸两类。酵母中富含的核糖核酸在碱处理下成为可溶性的钠盐与蛋白质等其它成分分开，然后用乙醇提...