RNA的制备与分析对于了解基因在转录水平上的表达与调控和cDNA的合成都是必须的，RNA的纯度和完整性对于Northern blot，RT-PCR和cDNA文库的构建等分子生物学实验都至关重要。RNA分离的方法很多，其中最关键的因素是尽量减少RNA酶的污染 实验目的：学习RNA的简...
一．原理 RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分，也是功能基因组学科研技术的重要基...
【原理】 RNA的制备与分析对于了解基因表达在转录水平上的调节是必不可少的,也是最常使用的通过cDNA途径分析细胞基因表达的前提。通常一个典型的哺乳动物细胞约含10-5g RNA，但其中大部分为rRNA及由tRNA，而mRNA仅占1%～5%。虽然mRNA大小和序列各不相同，但在...
主要仪器 研钵，恒温水浴，旋涡振荡器，冷冻台式高速离心机， 超低温冰箱，紫外检测仪，电泳仪，电泳槽。 试剂 1．Trizol试剂（购自Invitrogen公司） 2．焦碳酸二乙酯 (DEPC) 3．氯仿（新开封） 4．异丙醇（新开封） 5．无RNase灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶...
来源于任何细胞的RNA都可以通过反转录酶的作用拷贝成双链DNA并克隆化，获得相应的于特定细胞来源的cDNA文库。因此，RNA制备的意义有两个方面 * 获得特定细胞来源的cDNA文库，克隆目的基因 * 分析基因的表达，阐明基因调控的特性，了解从基因转录产生RNA的结构...
1，用异硫氰酸胍提取 提病毒的详细步骤，可参考（我提过N次做定量PCR都没问题）： 1.取 200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管 2.加600ul异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加200ul氯仿，颠倒混匀 3.13000rpm离心15min 4.在第3步离心快结束时...
一、准备 1、 物品：Trizol、氯仿（三氯甲烷）、异丙醇、75%灭酶异醇、冷PBS、1.5ml灭酶EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管 2、 打开冷冻离心机4℃预冷 二、操作步骤： 将Trizol、氯仿、冷PBS、EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管等物品带入细...
RNA的提取 准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制) 操作步骤: 1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。 b.单层培养细...
抽提微量RNA的柱子最大可以吸附45ug 的RNA。 为了更好地裂解，细胞数不能大于5105，细胞过多会减低产率和纯度。 准备工作： 1.在 24 ml 96－100％乙醇 中加入 6 ml 去RNA酶的水。 2.在每 1 ml Buffer RLT 中加入10 ml -ME (加入-ME的Buffer RLT可在室温下放置...
一.组织RNA提取 1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。 2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80℃或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4℃，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重...