2、等电点沉淀法 蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小，因而溶解度也最小，各种蛋白质的等电点有差别，可利用调节溶液的pH达到某一蛋白质的等电点使之沉淀，但此法很少单独使用，可与盐析法结合用。 3、低温有机溶剂沉淀法 用与水可混溶的有机溶剂，甲...

选择材料及预处理 以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是...

实验原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶为载体的一种区带电泳。该凝胶由丙烯酰胺（Acr）和交联剂N，N甲叉双丙烯聚酰胺（Bis）聚合而成。聚丙烯酰胺凝胶电泳利用电泳和分子筛的双重作用分离物质。 Acr和Bis单独存在或混合在一起时是稳定的，但在具有自...

蛋白质的提取工作是将经过处理或破碎的细胞，置于一定的条件和溶液中，让被提取物充分释放出来的过程。影响提取的因素主要是被提取物质在提取的溶液中溶解度的大小及由固相扩散到液相的难易程度。某一物质在溶剂中溶解度大小与该物质的分子结构及溶剂理化性质...

一、实验目的和内容 目的：1. 通过本次实验的学习与操作，使学生在实验过程更好的理解SDS-聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）测定蛋白质纯度与分子量的原理与依据； 2. 要求学生掌握电泳原理以及SDS－PAGE垂直板电泳分离蛋白质技术； 3. 熟悉垂直板电泳操作原理和方法，...

一、实验目的和原理 目的：学会交联法制备固定化酶的操作技术 内容：制备固定化酶的方法很多，利用双功能试剂或多功能试剂在酶分子间，酶分子与惰性蛋白间，或酶分子与载体间进行交联反应，以共价键制备固定化酶的方法称为交联法，本实验即采用这种方法。交联...

一、实验目的 通过发酵液中凝乳酶的提取纯化，了解酶提取纯化的方法，学习凝胶层析法的工作原理和基本操作技术。 二、实验原理 凝乳酶是一种酸性蛋白酶，其主要的生物学功能是有限剪切Phe105- Met106连接的-酪蛋白，导致牛奶凝结，从而被广泛应用干酪生产中。...

同时，为了监测分离纯化的效果，我们必须对相应的结果进行检测。对于酶而言，主要通过其催化特异的反应进行监测。溶菌酶对革兰氏阳性菌的细胞壁有明显的破坏作用，可利用这一特性进行溶菌酶活性的监测，以便我们区分在纯化过程中，含有溶菌酶的组分。 类似的...

2．加样蛋白浓度低于20 mg/mL，上样体积小于柱体积的1/3。 3. 在整个实验过程中，流速必须得到一定的控制。过大，会使填料压缩紧密，导致流速过低，层析柱有可能堵塞而实验失败，流速过小，实验时间过长，引起酶的活性变化。对于CM Sepharose FF填料，最适流...

一、实验目的和内容 目的：1. 通过本次实验的学习和操作，要求学生掌握离子层析的原理以及离子交换层析的操作方法； 2. 掌握离子交换树脂的再生和保存； 3．掌握比色法测定溶菌酶的酶活。 内容：采用离子交换层析对实验二获得的初提液，进行进一步的分离纯化...