实验原理： 1、SNP的概念及意义 单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP），主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。占所有已知多态性的90%以上。SNP在群体中的发生频率不小于1%...
原 理 限制性核酸内切酶能特异地识别双链DNA中的碱基序列，通过切割双链DNA中每一条链上的磷酸二酯键使DNA断裂。利用它可方便地按需要对DNA进行剪切加工。限制性核酸内切酶单位的定义为：在限定的温度和反应环境中，1小时消化1g DNA所需的酶量为一个酶单位。...
2、pUC质粒载体 1987年，J.Messing和J.Vieria采用MCS技术在pBR322基础上构建的。 结构： （1）来自于pBR322的Ori （2）氨苄青霉素的抗性基因(ampr)。 但核苷酸序列发生了变化 （3） LacZ基因 编码半乳糖酶的肽链即氨基末端。 （4）MCS区段 是一段用于插入外...
引 言 基因克隆的本质是使目的基因在特定的条件下得到扩增和表达，而目的基因本身无法进行复制和表达、不易进入受体细胞、不能稳定维持，所以就必须借助于载体及其寄主细胞来实现。 作为基因克隆的载体必须具备以下特性： ⑴载体必须是复制子。 ⑵具有合适的...
（三） DNA连接酶的反应条件 影响连接效率的因素有： 1. 温度（通常在4-15℃ ） 2. ATP的浓度(10M／L - 1mM／L ) 3. 连接酶浓度（一般平末端大约需1～2U，黏性末端仅需0.1U） 4. 反应时间（通常连接过夜） 5. 插入片段和载体片段的摩尔比（ 1∶1～5∶1） （四...
一、 限制性核酸内切酶及其应用 （一）限制性核酸内切酶的发现 当(k)噬菌体侵染E.coliB时，由于其DNA中有EcoB核酸酶特异识别的碱基序列，被降解掉。而E.coliB的DNA中虽然也存在这种特异序列，但可在EcoB甲基化酶的作用下，催化S-腺苷甲硫氨酸（SAM）将甲基转...
1.目的 管理好标准溶液及试液，保证化验正常运行。 2.适用范围 适用于标准溶液的配制、标定及试液的配制。 3.责任者 化验员应严格遵照该操作规程,QC主管负责监督本规程的实施。 4.定义 U美国药典 CP中国药典 VS标准溶液 6.规程 6.1.标准溶液的配制及标定如无...
DNA，RNA和蛋白质是三种重要的生物大分子，是生命现象的分子基...
引物（primers)：引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。 引物的重要性： 在整个PCR体系中, 引物占有十分重要的地位。PCR的特异性要求引物与靶DNA特异结合，...
荧光定量PCR实验指南 一、基本步骤： 1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对； 2、引物、探针的设计； 3、引物探针的合成； 4、反应体系的配制； 5、反应条件的设定； 6、反应体系和条件的优化； 7、荧光曲线和数据分析； 8、标准品的制备； 二、技术关键： 1...