一、原理 用三亲交配法将中间质粒转入农杆菌的过程需要三种细菌，即含有中质粒的大肠杆菌供体菌，含有游动质粒pRK2013的大肠杆菌协助菌(helper)和根癌农杆菌受体菌。当这三种菌混合时，协助质粒pRK2013游动进入大肠杆菌内，提供游动(mol)和转移(tra)功能，把...

一、原理 冠瘿瘤是根癌农杆菌感染双子叶植物后形成的一种形似帽状的瘤组织，该组织能在正常细胞不能生长的无激素培养基上无限制地生长。冠瘿瘤的形成，是由于根癌农杆菌Ti质粒上的T－DNA（可转移DNA，其中含致病和冠瘿碱合成酶等基因）整合到宿主植物细胞染色...

一、原理 发根农杆菌是一种寄主范围非常广泛的土壤细菌，可以侵染几乎所有的双子叶植物和少数单子叶植物。植物伤口感染发根农杆菌后，一到数周出现毛状根。毛状根没有向地性，除菌后在无激素培养基上可迅速生长并产生许多分枝。通过培养可直接从毛状根上再生...

一般情况下，可以根据质粒的大小来确定它是否带有插入片段。以下方法足以产生在琼脂糖凝胶的单个泳道上加样所需的DNA量。操作方法如下： 1. 使转化得到的细菌在含有氨卞青霉素的琼脂培养基(LB)上生长至菌落直径达1mm左右。 2. 用灭菌的牙签挑取单菌落的一小部...

实验原理 核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性质，其吸收高峰在260nm波长处。核酸的摩尔消光系数（或称吸收系数）用来表示。为每升溶液中含有1克原子核酸磷的光吸收值（即A值）（表）。测得未知浓度核酸溶液的A260nm值，即可以计算出其中RN...

Feulgen反应(Feulgen reaction)是显示DNA的最典型的组织化学反应，为学者Feulgen和Rossenbeck于1924年发明，简称为Feulgen法。因对 DNA的显示反应具有高度专一性，故常被用来显示细胞内DNA的分布情况。 1．实 验 目 的 1．1. 熟悉并掌握Feulgen反应的原理及其...

一、 实验原理 核酸分子（DNA或RNA）由于含有嘌吟环和嘧啶环的共轭双键，在260 nm波长处有特异的紫外吸收峰，其吸收强度与核酸的浓度成正比，这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基...

一、实验原理 体外连接的重组DNA分子导入合适的宿主细胞中才能大量的进行复制、增殖和表达。研究发现，用含Ca2+ 的溶液处理大肠杆菌细胞会易于吸收外源DNA。大肠杆菌吸收外源DNA的过程被称为转化。细菌处于容易吸收外源DNA的状态称为感受态。用理化方法可以诱...

1．目的 学会CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞。 2．原理 细菌在0℃ CaCl2低渗溶液中胀成球形，丢失部分膜蛋白，成为容易吸收外源DNA的状态。 3．器材 旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，50ml 微量离心管，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，台式冷冻...

1．目的 学会质粒DNA转化感受态受体菌的技术。 2．原理 质粒DNA粘附在细菌细胞表面，经过42C短时间的热击处理，促进吸收DNA。然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。 3．器材 旋涡混合器，微量移液取...