核酸探针是指能与特定核酸序列发生特异性互补的寡核苷酸链。核酸探针有双链DNA探针、单链DNA 探针、RNA探针和寡核苷酸探针。特异性探针来源于目的核酸的酶切片断、dd-PCR等差异显示中出现的差异片断、AFLP、RFLP、RAPD、SSR、CFLP等标记实验中出现的特异性基...
方法 1：重组载体构建同前面实验 2：诱导表达：提取带重组片断的质粒DNA转化BL21（DE3）受体菌37℃活化过夜，转入新鲜培养基摇菌至对数生长期（约2－3小时），加入IPTG至终浓度0.4mM，继续培养6小时 3：表达产物提取及鉴定见实验十九 二：融合表达 仪器：同...
1体外TNTRT7 转录/翻译系统表达重组基因 体外翻译是研究基因表达、基因调控的一类重要技术，该技术可广泛用于基因表达量、启动序列等调控因子的确立，并结合PTT实验筛选天然突变或人工诱变的基因片段，还可用来进行蛋白和DNA结合方面的研究。早期的体外翻译研...
报告基因被广泛地应用于细胞生物学中的基因表达和细胞相关内容的研究。常用的报告基因主要有GUS基因、CAT基因、hGH基因、Cato2ase基因、绿色荧光蛋白基因及萤火虫荧光素酶基因等。在这些报告基因中萤火虫荧光素酶基因因其表达产物－荧光素酶敏感性高，测定方...
电子杂交即虚拟的RNA杂交(Virtual northern blots)。用已知的EST序列为起始序列,采用BLAST(Basic Local Alignment Search Tool,BLAST)检索程序检索数据库中与其同源或有部分重叠的EST序列,以分别确定EST是属于已知基因还是已知EST或新发现的EST序列。 电子延...
经过这轮ＲＤＡ过程,Tester中的目的DNA将得到第一次富集。将第一轮产物更换新接头,进行第二轮RDA过程,目的DNA可得到进一步的富集。该技术假阳性很低。但仍不能解决个体mRNA在丰度上存在巨大差异的问题,当靶序列浓度较低时,其富集受抑制。 3：抑制消减杂交（su...
基因表达谱或基因表达轮廓（gene expressed profile）技术就是利用mRNA提...
Ⅰ 分光光度法 一、目的 熟练掌握分光光度法检测DNA纯度和浓度的方法。 二、原理 DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在 260nm处。波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。 对标准样品来说，浓度为1...
3.注意事项 （1）避光下准备反应体系：由于光敏生物素醋酸盐对光敏感，应避免光照。在分装试剂及核酸与光敏生物素混合时应在暗室安全灯下操作。 （2）核酸纯度：由于光敏生物素能与任何有机物反应，因此用做标记探针的核酸要高度纯化。用作标记探针的核酸最好...
一、核酸探针标记 核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。 核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同...