一、DNA 的提取 人和哺乳动物细胞基因组DNA的分离通常是在有EDTA、Sarkosye等一类去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚、氯仿抽提，经RNase 处理和纯化来提取DNA。 (1)取单层细胞，经无钙、镁PBS洗一次，用0.25%胰蛋白酶消化，细胞悬液经PBS洗2次,弃上...

【实验原理】 DNA印迹是1975年由英国Southern创建的。其基本原理是：DNA分子经限制性核酸内切酶酶切后，由琼脂糖凝胶电泳将所得 DNA片段按分子质量大小分离，然后将DNA片段变性，并使凝胶中的单链DNA片段转移到尼龙膜、硝酸纤维素膜(NC)或其他固相支持物上，...

原理： 将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者...

C．转移按凝胶的大小剪裁NC膜或尼龙膜并剪去一角作为标记，水浸湿后，浸入转移液中5min。剪一张比膜稍宽的长条Whatman 3mm滤纸作为盐桥，再按凝胶的尺寸剪3-5张滤纸和大量的纸巾备用。按下图所示进行转移。（ 转移过程一般需要8-24hr，每隔数hr换掉已经湿掉的...

体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组 研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入，可以改变对应的氨...

1、引物设计：每条引物都要携带有所需的突变位点，引物一般长25~45bp,设计的突变位点需位于引物中部。 2、反应：使用高保真的pyrobest DNA聚合酶 ;循环次数少，一般为12个循环。 反应体系： 10x pyrobest Buffer 5 ul dNTP Mixture(10mM) 1ul 模板DNA(5~50ng)...

一、原理 转座子（Tn）是能在不同复制子之间转移位置的核苷酸顺序。它一般来自抗药性质粒，由一个或几个抗药性基因加上两端两个顺序相同（但是方向不一定相同）的核苷酸片段（称为插入顺序IS）构成。当一个转座子转移位置而插入某一基因时，能使这一基因失活...

sanger是英国生物化学家，1918年8月13日生于英格兰格洛斯特夏郡，在剑桥大学圣 约翰学院获哲学博士学位，毕业后到著名的剑桥医学研究会分子生物学实验室工作。Sanger的工作主要研究蛋白质的结构，特别是研究测定胰鸟素分子的结构，成功地测定了胰鸟素的精细结...

DNA序列测定分手工测序和自动测序，手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪，其中310型是临床检测实验室中使用最多...

常见问题 具体情况 可能的原因 处理办法 备注 样品准备问题 菌培养不好或失败 抗性不对或菌已死 核对抗性，尽可能提供载体信息。 或菌培养条件特殊 重新提供菌液，或提供2g纯化质粒。 质粒提不出 质粒拷贝数极低或 客户自己采取大量提取的方法提供2g纯化质粒...