⑦60伏电泳过夜。 ⑧取出凝胶，水中浸泡2次，每次5min。 ⑨室温下将胶浸到50mmol/L NaOH和10mmol/l NaCl中45min，水解高分子RNA，以增强转...

（1）DAN斑点杂交 ①先将膜在水中浸湿，再放到15SSC中。 ②将DNA样品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。 ③用铅笔在滤膜上标好位置，将DNA点样于膜上。每个样品一般点50l（2～10g DNA）。 ④将膜烘干，密封保存备用。 （2）RNA斑点杂交：与上法类似，每个样品...

一、原位杂交( In Situ Hybridization,ISH) 是用标记的核酸探针，使用非放射检测系统或放射自显影系统，在组织切片、细胞涂片及染色体制片上等对核酸进行定性、定位和相对定量研究的一种分子生物学方法，具有灵敏、特异、直观等优点。已逐渐成为分子生物学和...

将凝胶中的DNA进行碱变性并将pH值恢复至中性后，即可将凝胶中的DNA片段转移到固相支持物上。用于转膜的固相支持物有多种，包括硝酸纤维素滤膜(NCM)、尼龙膜、化学活性膜和滤纸等， Southern转膜时可根据需要选择不同的固相支持物用于杂交。常用的Southern转膜...

实验原理： Southern Blot是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行...

第一天 (restriction enzyme digestion) 1.取待測的genomic DNA，用二次水稀釋10倍 (30l的DNA 加270lddH2O 300l) 2.換算genomic DNA濃度(OD260)，再換算取10g所需的體積。 3.取10g DNA，用限制酵素EcoRI、BamHI各2l切O/N，將total體積調成400l。(最好用1.5mL...

三：操作 (一)转膜 1电泳 2切胶 在紫外下，切取凝胶有条带部分 3脱嘌啉0.25NHCL浸泡凝胶10分钟，蒸馏水洗胶（大于15kb的DNA片段转移时做此步骤） 4变性，变性液（0.5MNaOH、1.5MNaCL）浸泡凝胶2次，每次15分钟，蒸馏水洗胶 5中和,中和液（0.5Mtris-HCL,pH7.0...

Southern技术是指以Southern名字命名的DNA转移杂交技术。它可用于基因组特定DNA序列的定位，可以测定相关片段的同源性、可以从c库、基因组文库中筛选完整基因等。用一种或多种限制性内切酶对基因组DNA加以切割，通过琼脂糖凝胶电泳分离酶切片段，随后，使DNA...

3）杂交：排尽预杂交液，在8.0ml 新Hyb 高效杂交液（Hyb-100）加入4.0l 新变性好的探针(1-3ul/膜，5-20ng/ml杂交液)，混匀。65℃杂交仪中杂交过夜（8-15转/分）。 4）杂交完成后，将杂交液回收置于一可耐低温又可耐沸水浴的管中，贮存于-70℃以备重复使用。重...

）标记探针检测 取标记产物和普通PCR扩增产物各1l，1.0%的琼脂糖凝胶电泳。由于大分子量的DIG掺入，标记产物泳动速度比普通PCR产物要慢。所以根据电泳图就可以判断是否标记上和有没有非特异标记！其余标记产物-20℃保存。 如果要准确检测标记效率（一般不必）...