一、 试剂与材料： 1、 琼脂糖 2、 电泳缓冲液（1TAE） 3、 10mg/ml溴化乙锭 4、 上样缓冲液 5、 电泳仪和水平电泳漕 6、 透射紫外灯 7、 胶带纸 二、 操作方法 按1～2%的琼脂糖浓度（据DNA样品分子量不同而定）配胶100ml 置于微波炉内加热搅拌，至琼脂糖完全...
（一）DNA的凝胶电泳：凝胶电泳是分子克隆的中心技术之一。 1.琼脂糖凝胶用于分离大于200～1000bp的片段;操作简单、快速，且分离范围广，分辨率高。 2.聚丙烯酰胺凝胶用于分离5－500bp的片段; 效果好、分辨率极高，相差1bp的DNA片断就能分开，能容纳相对大量...
不同的带电颗粒在同一电场中泳动的速度不同。常用泳动度（或迁移率）来表示。泳动度是指带电颗粒在单位电场强度下泳的速度。 影响泳动度的主要因素有： 1、首先决定于带颗粒的性质，即颗粒所带净电荷的数量，大小及形状 一般说来，颗粒带净电荷多，直径小而接...
电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。例如蛋白质具有两性电离性质。当蛋白质溶液的pH在蛋白质等电点的碱侧时，该蛋白质带负电荷，在电场中向正极移动，相反则带正电荷，在电场中向负极移动，只有蛋白质溶液pH在蛋白质的等电点时静电荷...
探针冷竞争反应： Nuclease-Free Water 4微升 EMSA/Gel-Shift结合缓冲液（5X） 2微升 细胞核蛋白或纯化的转录因子 2微升 未标记的探针 1微升 标记好的探针 1微升 总体积 10微升 突变探针的冷竞争反应： Nuclease-Free Water 4微升 EMSA/Gel-Shift结合缓冲液（...
1.探针的标记： （1） 如下设置探针标记的反应体系： 待标记探针 （1.75pmol/微升） 2微升 T4 Polynucleotide Kinase Buffer （10X） 1微升 Nuclease-Free Water 5微升 [-32P]ATP（3,000Ci/mmol at 10mCi/ml） 1微升 T4 Polynucleotide Kinase （5-10U/微升）...
TFIIB与预启动复合物结合后，致使RNA聚合酶II和TFIIF结合到转录启始区。故TFIIB在预启动复合物的形成中有重要作用。当用纯化的 TFIID作凝胶迁移实验时，poly dI-dC不用加入结合反应中。结合缓冲液含10%甘油，20mM Tris（pH8.0）， 10mM MgCl2, 2mM DTT, 89mM...
1.AP1（激活蛋白1）： 是一个转录调节因子，它结合的同源序列为5-TGAGTCA-3。当基因的启动子区域存在AP1的结合位点时，这些基因可以被诱导，比如用佛波酯可诱导蛋白激酶C（2,7）。在细胞中，AP1形成c-Jun或Jun相关蛋白的同聚双体，或者形成c-Jun或Jun相关蛋白...
（1）什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？ 凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常...
聚丙烯酰胺凝胶电泳，普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大适用于分离同工酶及其亚型，大分子核酸等应用较广。琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA度大小范围较广，不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp...