从总RNA中分离mRNA 采用Promega公司的PolyATract mRNA Isolation System III。 使用该试剂盒，mRNA产量极低，因此下述方法是以Promega公司试剂盒操作手册为基础，并采用储昭晖硕士(作物遗传改良国家重点实验室植物分子生物学水稻分室)所建议的改进方法综合而...

3， 稍离心 4， 100℃沸水浴1分钟 5， 趁热加入Tag酶0.5ul（冰上操作） 6， 再加入50ul液体石蜡封闭 7， 10000rmp离心1分钟 8， PCR条件 94℃ 1min 58℃ 50sec 72℃ 1min30sec 进行40个循环，然后72℃ 10min 完后4℃保温。 9，10000rmp离心5min 10，将下层水...

逆转录（RT） 一，准备工作 1， 实验器具与材料： （1）移液枪：200ul、10ul （2）吸头：200ul、20ul （3）EP 管1.5ml、100ul （4）水浴箱 2，实验器具的处理与准备 塑料制品：（包括吸头、EP管等） 将塑料制品逐个浸泡于 1DEPC水中（必要时小枪头需要用吸管...

RNA抽提 一，准备工作 1， 实验器具与材料： （1） 移液枪：1ml、200ul、10ul （2） 吸头：1ml、200ul、20ul （3） 吸头台：放置1ml吸头的一个，放置200ul和20ul的吸头一个 （4） EP管1.5ml、100ul （5） 玻璃研磨器 （6） 容量瓶：1000ml （7） 盐水瓶：100m...

【实验原理】 Trizol 试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA 的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA 的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA 可以通过异丙醇沉淀获得。 【实验仪器】 1. 匀浆机 2. 低...

真核细胞的mRAN是单顺反子，其最显著的特征是具有５端帽子结构和3端的poly A的结构，此poly A结构为mRNA的提取提供了有效的途径，人们利用碱基配对原理，采用寡聚Ｔ结构作为亲和柱材料，当含mRNA的总RNA样品流经寡聚Ｔ柱时，mRAN即被特异性的结合到柱上，从而...

一、实验目的 通过本实验学习从植物组织中提取RNA的方法 二、实验原理 RNA是一类极易降解的分子，要得到完整的RNA，必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓度强变性剂异硫氰酸胍，可溶解蛋白质，破坏细胞结构，使核蛋白与核...

内 容 提 要 利用酸-苯酚法提取植物叶片中的RNA，并对其进行纯化，最后利用反转录酶得到相应的cDNA，可用于以后的分子生物学操作。 本实验要求： 1、掌握酸-苯酚法提取RNA的方法。 2、了解RNA操作中的重要性。 原 理 从真核生物的组织或细胞中提取mRNA,通过酶...

（二）TRIzol试剂提取RNA 1.取新鲜动物组织0.1～0.2g置于组织匀浆器中，加入预冷的Trizol液 1ml 于玻璃匀浆器中，在冰浴中迅速匀浆15～30s，以充分研碎组织。然后将细胞悬浮液吸入另一1.5ml Ep管中，于室温下静置5min。 2.加入200l氯仿，剧烈振摇15s混匀后，...

一、实验原理 RNA是基因表达的中间产物，存在于细胞质与核中。对RNA进行操作在分子生物学中占有重要地位。获得高纯度和完整的RNA 是很多分子生物学实验所必需的，如Northern杂交、cDNA合成及体外翻译等实验的成败，在很大程度上取决于RNA的质量。由于细胞内的...